本文選題：先天性巨結(jié)腸　切入點：MEG3　出處：《遵義醫(yī)學院》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:檢測長鏈非編碼RNA母系表達基因3(maternally expressed gene 3 MEG3)在小兒先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung’s disease HD)病變腸管中的表達情況,并通過觀察過表達MEG3對人神經(jīng)母細胞瘤細胞株(SK-N-BE(2))增殖、克隆、侵襲及凋亡的影響,探討MEG3在HD中的作用及作用機制。方法:用RT-q PCR方法檢測17例HD患兒病變結(jié)腸組織和17例非HD也無腸道畸形嬰兒正常結(jié)腸組織中MEG3的表達量,用PASS檢測其效能,并用ROC曲線下面積(AUC)及95%可行區(qū)間表示MEG3在HD中的診斷效能,評價MEG3在HD中的診斷價值。應用細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染技術,在SK-N-BE(2)細胞中轉(zhuǎn)染MEG3過表達質(zhì)粒,設立MEG3高表達組、空載體組及對照組,并應用CCK-8、Edu細胞增殖實驗、平板克隆技術、TRANSWELL技術、流式細胞實驗分別檢測過表達MEG3對SK-N-BE(2)細胞的增殖能力、克隆能力、侵襲能力及凋亡情況的影響。結(jié)果:RT-qPCR結(jié)果顯示:HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達量較正常結(jié)腸組織中MEG3表達量明顯升高(P0.01),效能檢測顯示效能達標,實現(xiàn)100%的檢測功率,ROC曲線顯示:曲線下面積(AUC)為84.9%,(95%可行區(qū)間71.6%-98.3%),最佳陽性截斷值(cut off value)為1.46,靈敏度為82.4%,特異度為82.4%。MEG3過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SK-N-BE(2)細胞,轉(zhuǎn)染效率為35.4%,達到轉(zhuǎn)染要求,MEG3過表達組細胞的增殖能力、克隆能力以及侵襲能力與空載體組及對照組比較明顯降低(P0.01),流式細胞檢測顯示:MEG3高表達組與空載體組及對照組比較細胞凋亡明顯增加(P0.01)。結(jié)論:HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達量明顯升高,MEG3可能通過調(diào)控SK-N-BE(2)細胞的增殖、克隆、侵襲與凋亡參與HD的發(fā)病,在HD的早期診斷與治療中具有一定臨床價值。
[Abstract]:Objective: to detect the expression of long chain noncoding RNA gene 3maternally expressed gene 3 MEG3 in the intestinal duct of Hirschsprunggs disease (HD) in children with congenital megacolon, and to observe the proliferation and cloning of human neuroblastoma cell line SK-N-BEN 2 by overexpression of MEG3. To explore the role and mechanism of MEG3 in HD. Methods: the expression of MEG3 in colon tissues of 17 children with HD and 17 normal colonic tissues with non HD and no intestinal malformation was detected by RT-q PCR method. PASS was used to detect its efficacy, and the area under the ROC curve and the feasible range of 95% were used to express the diagnostic efficacy of MEG3 in HD, and to evaluate the diagnostic value of MEG3 in HD. By means of cell culture and transfection technique, MEG3 overexpression plasmid was transfected into SK-N-BE2) cells. The high expression group of MEG3, empty vector group and control group were established. The proliferation and cloning ability of SK-N-BE2) cells were detected by using CCK-8 Edu cell proliferation assay, plate cloning technique, TRANSWELL technique and flow cytometry, respectively. Results the expression of MEG3 in the diseased colon tissue of the children with head HD was significantly higher than that in the normal colon tissue (P 0.01), and the efficiency of the detection was up to the standard. The detection power curve of 100% showed that the area under the curve was 84.9% and the feasible range was 71.6-98.30.The optimal truncation value cut off value was 1.46, the sensitivity was 82.4%, the specificity was 82.4% and the specificity was 82.4%. The transfection efficiency was 35.4g / kg, and the proliferation ability of the cells in the overexpression group of MEG3 was reached. Compared with empty vector group and control group, clone ability and invasion ability decreased significantly (P 0.01). Flow cytometry showed that cell apoptosis in the high expression group of 10% MEG3 was significantly higher than that in empty vector group and control group. Conclusion the pathological changes of colon tissue in children with 20% HD were significantly higher than those in control group. The expression of MEG3 in SK-N-BE2) cells increased significantly, and MEG3 may regulate the proliferation of SK-N-BE2) cells. Cloning, invasion and apoptosis play an important role in the early diagnosis and treatment of HD.
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R725.7

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