本文選題：先天性巨結(jié)腸　切入點(diǎn)：MEG3　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼RNA母系表達(dá)基因3(maternally expressed gene 3 MEG3)在小兒先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung’s disease HD)病變腸管中的表達(dá)情況,并通過(guò)觀察過(guò)表達(dá)MEG3對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SK-N-BE(2))增殖、克隆、侵襲及凋亡的影響,探討MEG3在HD中的作用及作用機(jī)制。方法:用RT-q PCR方法檢測(cè)17例HD患兒病變結(jié)腸組織和17例非HD也無(wú)腸道畸形嬰兒正常結(jié)腸組織中MEG3的表達(dá)量,用PASS檢測(cè)其效能,并用ROC曲線下面積(AUC)及95%可行區(qū)間表示MEG3在HD中的診斷效能,評(píng)價(jià)MEG3在HD中的診斷價(jià)值。應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染技術(shù),在SK-N-BE(2)細(xì)胞中轉(zhuǎn)染MEG3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,設(shè)立MEG3高表達(dá)組、空載體組及對(duì)照組,并應(yīng)用CCK-8、Edu細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆技術(shù)、TRANSWELL技術(shù)、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)過(guò)表達(dá)MEG3對(duì)SK-N-BE(2)細(xì)胞的增殖能力、克隆能力、侵襲能力及凋亡情況的影響。結(jié)果:RT-qPCR結(jié)果顯示:HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量較正常結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量明顯升高(P0.01),效能檢測(cè)顯示效能達(dá)標(biāo),實(shí)現(xiàn)100%的檢測(cè)功率,ROC曲線顯示:曲線下面積(AUC)為84.9%,(95%可行區(qū)間71.6%-98.3%),最佳陽(yáng)性截?cái)嘀?cut off value)為1.46,靈敏度為82.4%,特異度為82.4%。MEG3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SK-N-BE(2)細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率為35.4%,達(dá)到轉(zhuǎn)染要求,MEG3過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的增殖能力、克隆能力以及侵襲能力與空載體組及對(duì)照組比較明顯降低(P0.01),流式細(xì)胞檢測(cè)顯示:MEG3高表達(dá)組與空載體組及對(duì)照組比較細(xì)胞凋亡明顯增加(P0.01)。結(jié)論:HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量明顯升高,MEG3可能通過(guò)調(diào)控SK-N-BE(2)細(xì)胞的增殖、克隆、侵襲與凋亡參與HD的發(fā)病,在HD的早期診斷與治療中具有一定臨床價(jià)值。
[Abstract]:Objective: to detect the expression of long chain noncoding RNA gene 3maternally expressed gene 3 MEG3 in the intestinal duct of Hirschsprunggs disease (HD) in children with congenital megacolon, and to observe the proliferation and cloning of human neuroblastoma cell line SK-N-BEN 2 by overexpression of MEG3. To explore the role and mechanism of MEG3 in HD. Methods: the expression of MEG3 in colon tissues of 17 children with HD and 17 normal colonic tissues with non HD and no intestinal malformation was detected by RT-q PCR method. PASS was used to detect its efficacy, and the area under the ROC curve and the feasible range of 95% were used to express the diagnostic efficacy of MEG3 in HD, and to evaluate the diagnostic value of MEG3 in HD. By means of cell culture and transfection technique, MEG3 overexpression plasmid was transfected into SK-N-BE2) cells. The high expression group of MEG3, empty vector group and control group were established. The proliferation and cloning ability of SK-N-BE2) cells were detected by using CCK-8 Edu cell proliferation assay, plate cloning technique, TRANSWELL technique and flow cytometry, respectively. Results the expression of MEG3 in the diseased colon tissue of the children with head HD was significantly higher than that in the normal colon tissue (P 0.01), and the efficiency of the detection was up to the standard. The detection power curve of 100% showed that the area under the curve was 84.9% and the feasible range was 71.6-98.30.The optimal truncation value cut off value was 1.46, the sensitivity was 82.4%, the specificity was 82.4% and the specificity was 82.4%. The transfection efficiency was 35.4g / kg, and the proliferation ability of the cells in the overexpression group of MEG3 was reached. Compared with empty vector group and control group, clone ability and invasion ability decreased significantly (P 0.01). Flow cytometry showed that cell apoptosis in the high expression group of 10% MEG3 was significantly higher than that in empty vector group and control group. Conclusion the pathological changes of colon tissue in children with 20% HD were significantly higher than those in control group. The expression of MEG3 in SK-N-BE2) cells increased significantly, and MEG3 may regulate the proliferation of SK-N-BE2) cells. Cloning, invasion and apoptosis play an important role in the early diagnosis and treatment of HD.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R725.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭偉,石一復(fù),謝幸,徐建云,程琪,沈敏;TELOMERASE RNA AND TELOMERASE ACTIVITY IN TROPHOBLASTIC TUMORS[J];Journal of Zhejiang University Science;2000年02期

2 魯慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

3 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中國(guó)輸血雜志;2001年S1期

4 付漢江,鄭曉飛;類(lèi)mRNA RNA研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2002年04期

5 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗核殼和RNA的穩(wěn)定性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2002年01期

6 CMBE譯文組;探索小RNA的功能[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2004年03期

7 沈維干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

8 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期

9 孫娣;汪洋;張麗娟;閆玉清;;一種簡(jiǎn)捷提取植物總RNA的方法[J];黑龍江醫(yī)藥;2005年06期

10 熊慧華;于世英;胡廣原;莊亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2006年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 金由辛;;面向21世紀(jì)的RNA研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

2 ;第四屆RNA全國(guó)研討會(huì)大會(huì)報(bào)告日程安排[A];第四屆全國(guó)RNA進(jìn)展研討會(huì)論文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國(guó)植物生物學(xué)研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

4 王峰;張秋平;陳金湘;;棉花總RNA的快速提取方法[A];中國(guó)棉花學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文匯編[C];2011年

5 關(guān)力;陳本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱蘇吾;苗健;;關(guān)于動(dòng)物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中國(guó)生理科學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編（生物化學(xué)）[C];1964年

6 夏海濱;;小RNA在免疫學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第四屆輸血大會(huì)論文集[C];2006年

8 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應(yīng)用[A];2006中國(guó)微生物學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

9 甘儀梅;楊業(yè)華;王學(xué)奎;曹燕;楊特武;;棉花總RNA快速提取[A];中國(guó)棉花學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文匯編[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)第四屆全國(guó)學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)暨基因科學(xué)高峰論壇論文專(zhuān)輯[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 馮衛(wèi)東;研究人員發(fā)現(xiàn)可破壞腫瘤抑制基因的小RNA[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 記者 儲(chǔ)笑抒 通訊員 盛偉;人體微小RNA有望提前發(fā)出癌癥預(yù)警[N];南京日?qǐng)?bào);2011年

3 瀘州醫(yī)學(xué)院副教授、科普作家 周志遠(yuǎn);“大頭兒子”與環(huán)狀RNA[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2014年

4 麥迪信;小分子RNA可能有大作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

5 董映璧;美發(fā)現(xiàn)基因調(diào)控可回應(yīng)“RNA世界”[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

6 張忠霞;特制RNA輕推一下,就能“喚醒”基因[N];新華每日電訊;2007年

7 聶翠蓉;RNA：縱是配角也精彩[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

8 馮衛(wèi)東;RNA干擾機(jī)制首次在人體中獲得證實(shí)[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

9 馮衛(wèi)東　王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類(lèi)RNA[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

10 記者 常麗君;新技術(shù)讓研究進(jìn)入單細(xì)胞內(nèi)RNA的世界[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王趙瑋;昆蟲(chóng)RNA病毒復(fù)制及昆蟲(chóng)抗病毒天然免疫機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

2 包純;一類(lèi)新非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)以及產(chǎn)生和功能的初探[D];華中師范大學(xué);2015年

3 李語(yǔ)麗;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修飾的研究[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3調(diào)控長(zhǎng)鏈非編碼 RNA Lethe促進(jìn)HCV復(fù)制的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 范春節(jié);高通量測(cè)序鑒定毛竹小RNA及其功能分析[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

6 王加強(qiáng);小鼠著床前胚胎特異ERV相關(guān)長(zhǎng)非編碼RNA的定向篩選及功能研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王業(yè)偉;非編碼RNA SPIU的結(jié)構(gòu)和功能研究和p19INK4D在APL發(fā)病中的作用[D];上海交通大學(xué);2013年

8 鄒艷芬;子癇前期中非編碼RNA對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞功能的調(diào)控及機(jī)制探索[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

9 朱喬;miR-10b在人肝細(xì)胞肝癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步探索[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 蔣俊鋒;長(zhǎng)鏈非編碼RNA BACE1-AS促進(jìn)Aβ聚集及其調(diào)節(jié)BACE1和SERF1a的ceRNA機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陸聰兒;條紋斑竹鯊再生肝臟中差異RNA的研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 張曉輝;小鼠幾種長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因功能的初步研究[D];昆明理工大學(xué);2015年

3 全弘揚(yáng);長(zhǎng)鏈非編碼RNA在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中的相關(guān)作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 胡亮;DDX19A識(shí)別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 張帥兵;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)對(duì)旋毛蟲(chóng)Nudix水解酶基因功能的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

6 鄭芳芳;肺癌RNA-Seq數(shù)據(jù)中RNA編輯事件的識(shí)別算法和系統(tǒng)分析[D];蘇州大學(xué);2015年

7 陳瑞東;長(zhǎng)鏈非編碼RNA MEG3在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

8 劉駿武;線蟲(chóng)和水稻中環(huán)狀RNA的預(yù)測(cè)及分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李猷;利用RNA干擾技術(shù)提高番茄抗TMV侵染能力的研究[D];牡丹江師范學(xué)院;2015年

10 吳術(shù)盛;SVCV感染EPC細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1618789