本文選題：柴油　切入點：降解　出處：《微生物學(xué)通報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】構(gòu)建柴油降解基因工程菌,提高柴油降解速率,研究p450基因在柴油降解過程中的作用。【方法】將Alcanivorax borkumensis SK2的p450基因合成后,連接至烷烴響應(yīng)表達(dá)載體p Com8中,構(gòu)建該基因的表達(dá)載體p450-SK2/p Com8,并將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中,通過SDS-PAGE檢測該基因在大腸桿菌DH5α中的表達(dá),并將重組質(zhì)粒p450-SK2/p Com8轉(zhuǎn)入柴油降解菌Acinetobacter sp.Y9中,構(gòu)建基因工程菌p450-SK2/Y9,研究工程菌p450-SK2/Y9對柴油的降解特性及p450基因在構(gòu)建的工程菌p450-SK2/Y9中的表達(dá)。【結(jié)果】PCR、酶切及測序結(jié)果表明重組質(zhì)粒p450-SK2/p Com8構(gòu)建正確。當(dāng)柴油誘導(dǎo)濃度大于1%時,目的基因在大腸桿菌DH5α中的蛋白表達(dá)量較大,且隨著誘導(dǎo)時間的延長而呈增加趨勢。通過PCR檢測構(gòu)建的基因工程菌p450-SK2/Y9中的p450基因表明,工程菌構(gòu)建正確,利用單菌株降解柴油時,宿主菌Y9與工程菌p450-SK2/Y9的柴油降解效率未見明顯差異,但工程菌p450-SK2/Y9在構(gòu)建的菌群中對柴油降解的促進(jìn)效果明顯。SDS-PAGE結(jié)果表明,p450基因在構(gòu)建的工程菌p450-SK2/Y9中能得到準(zhǔn)確表達(dá),在混合菌中的表達(dá)量高于單菌株�！窘Y(jié)論】柴油降解基因工程菌在混合菌群中對柴油降解具有促進(jìn)作用,而在單菌株情況下未見促進(jìn)作用,且p450基因的蛋白表達(dá)在混合菌中也高于單菌株,這對于提高柴油的降解速率及研究p450基因在柴油降解過程中的作用機(jī)理具有一定意義。
[Abstract]:[objective] to construct genetically engineered bacteria for diesel oil degradation, to improve diesel degradation rate, and to study the role of p450 gene in diesel oil degradation. [methods] the p450 gene of Alcanivorax borkumensis SK2 was synthesized and ligated into the alkane response expression vector p Com8. The expression vector p450-SK2 / p Com8 was constructed and transferred into Escherichia coli DH5 偽. The expression of the gene in E. coli DH5 偽 was detected by SDS-PAGE, and the recombinant plasmid p450-SK2 / p Com8 was transformed into Acinetobacter sp.Y9. The biodegradation of diesel oil by p450-SK2 / Y9 and the expression of p450 gene in p450-SK2 / Y9 were studied. [results] PCR, restriction endonuclease digestion and sequencing showed that the recombinant plasmid p450-SK2 / P Com8 was constructed correctly. The expression of p450 gene in Escherichia coli DH5 偽 was higher than that in Escherichia coli DH5 偽, and increased with the prolongation of induction time. The p450 gene in p450-SK2 / Y9 genetically engineered strain constructed by PCR showed that the construction of the engineered strain was correct. When the single strain was used to degrade diesel oil, there was no significant difference in diesel degradation efficiency between the host strain Y9 and the engineering strain p450-SK2 / Y9. The results of SDS-PAGE showed that the gene of p450-SK2 / Y9 could be expressed accurately in the constructed strain p450-SK2 / Y9. [conclusion] the gene engineering bacteria of diesel degradation can promote the degradation of diesel oil in the mixed bacteria, but not in the case of a single strain, but not in the case of a single strain. [conclusion] the gene engineering bacteria can promote the degradation of diesel oil in the mixed bacteria, but not in the case of a single strain. The protein expression of p450 gene is also higher in mixed bacteria than in single strain, which is of significance for improving the degradation rate of diesel oil and studying the mechanism of p450 gene in the degradation of diesel oil.
【作者單位】： 海軍醫(yī)學(xué)研究所;
【分類號】：X172

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