本文選題：嗜熱真菌　切入點：α-半乳糖苷酶　出處：《生物技術(shù)通報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：從嗜熱子囊菌(Thermoascus crustaceus)JCM12803克隆α-半乳糖苷酶基因,并對其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的研究,旨為獲得工業(yè)應(yīng)用性質(zhì)優(yōu)良的α-半乳糖苷酶。通過RT-PCR方法從T.crustaceus JCM12803中克隆α-半乳糖苷酶基因序列,并對其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的分析。結(jié)果顯示,tcgal27A屬于糖苷水解酶27家族,基因全長1 918 bp,含有4個內(nèi)含子,c DNA全長1 419 bp,編碼472個氨基酸,預(yù)測tcgal27A N端含有24個氨基酸為其可能的信號肽。將TCGal27A在畢赤酵母中成功地進(jìn)行了表達(dá),所獲得的重組TCGal27A具有高比活(336.5 U/mg)及寬泛的底物特異性,對蜜二糖(14.4 U/mg)、棉子糖(9.1 U/mg)、角豆膠(3.6 U/mg)、魔芋粉(1.6 U/mg)、瓜爾豆膠(1.3 U/mg)、水蘇糖(0.7 U/mg)都有著不同程度的降解作用。以pNPG為底物時的Km值為1.6mol/m L,Vmax為536.8μmo L/(min·mg)。TCGal27A的最適作用pH為4.5,最適溫度為65℃,50℃處理1 h之后酶活力還能保持86.0%。這些結(jié)果表明耐高溫TCGal27A性質(zhì)優(yōu)良,可添加到飼料中,在消化和提高豆粕蛋白能量利用率方面有良好的潛在應(yīng)用價值。
[Abstract]:From Thermoascus aurantiacus (Thermoascus crustaceus) JCM12803 cloning of alpha galactosidase gene, and systematic study on its enzymatic properties, in order to obtain excellent industrial application properties of alpha galactosidase. Cloning of alpha galactosidase gene sequence from T.crustaceus JCM12803 by RT-PCR method, and its enzymatic properties were analyzed. The results show that tcgal27A belongs to glycoside hydrolase family 27, gene is 1918 BP, containing 4 introns, C DNA was 1419 BP, encoding 472 amino acids, prediction of tcgal27A N terminal 24 amino acids for its possible signal peptide. TCGal27A in Pichia pastoris was carried out successfully the expression of the obtained recombinant TCGal27A with high specific activity (336.5 U/mg) and broad substrate specificity, two of honey sugar (14.4 U/mg), raffinose (9.1 U/mg), carob (3.6 U/mg), konjac powder (1.6 U/mg), guar gum (1.3 U/mg) Stachyose, (0.7 U/mg) have different degrees of degradation. Using pNPG as the substrate when the Km value is 1.6mol/m L, Vmax 536.8 Mo L/ (min mg) the optimum effect of.TCGal27A pH was 4.5, the optimum temperature is 65 DEG, 50 DEG C after treatment for 1 h enzyme activity these results indicate that 86.0%. can maintain excellent properties of high temperature resistant TCGal27A, can be added to the feed, the digestion and improvement have good potential application value of the soybean protein energy utilization.

【作者單位】： 工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室天津市工業(yè)微生物重點實驗室天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所;北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家杰出青年科學(xué)基金(31225026)
【分類號】：Q78;Q936

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3 楊e，

本文編號：1579753