發(fā)布時(shí)間：2018-03-04 08:33

  本文選題：轉(zhuǎn)基因玉米　切入點(diǎn)：品系VCO--　出處：《食品科學(xué)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：建立基于QX100微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)平臺(tái)的我國未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式數(shù)字PCR定量檢測方法。該方法選擇基因組中單拷貝的玉米內(nèi)源基因hmg和VCO-01981-5品系邊界序列為定量靶序列,分別設(shè)計(jì)不同的PCR擴(kuò)增引物和TaqMan探針,并對(duì)兩種探針用不同的熒光進(jìn)行標(biāo)記,然后將上述探針和引物置于同一個(gè)PCR反應(yīng)體系中以同時(shí)定量兩個(gè)靶標(biāo)序列。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該法只有VCO-01981-5品系的兩個(gè)靶序列才都有擴(kuò)增信號(hào)。靈敏度、線性和準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在定量結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于25%時(shí),最低可穩(wěn)定定量5個(gè)拷貝的VCO-01981-5品系特異性序列分子和4個(gè)拷貝的內(nèi)源基因hmg分子;而在高達(dá)50 ng模板DNA以下范圍內(nèi),PCR反應(yīng)模板量與測定樣品拷貝數(shù)之間呈高度正相關(guān),相關(guān)系數(shù)達(dá)0.99以上;平均誤差小于10%。結(jié)果表明本研究建立的該玉米品系定量方法特異性強(qiáng),穩(wěn)定性好,精確性、準(zhǔn)確性以及靈敏度高,定量范圍廣,可用于進(jìn)、出口農(nóng)產(chǎn)品和食品中該轉(zhuǎn)基因玉米品系成分的定量檢測。此外,該法還可為其他轉(zhuǎn)基因玉米品系及其他轉(zhuǎn)基因作物品系建立類似定量檢測方法提供參考。
[Abstract]:A double microdrop digital PCR quantitative detection method for transgenic maize strain VCO-01981-5 based on QX100 microdrop polymerase chain reactionation platform was established. The method was used to select the single copy maize endogenous gene in the genome. Because the boundary sequences of hmg and VCO-01981-5 strains are quantitative target sequences, Different PCR amplification primers and TaqMan probes were designed, and the two probes were labeled with different fluorescence. Then the probe and primer were placed in the same PCR reaction system to quantify the two target sequences simultaneously. The specificity experiment showed that only the two target sequences of the VCO-01981-5 strain had amplification signal. The results of linear and accuracy experiments showed that when the relative standard deviation of quantitative results was not greater than 25, the lowest stable quantification of 5 copies of VCO-01981-5 strain specific sequence molecules and 4 copies of endogenous gene hmg molecules; However, within the range of up to 50 ng template DNA, there was a highly positive correlation between the amount of template and the copy number of the sample, the correlation coefficient was more than 0.99, and the average error was less than 10%. The results showed that the quantitative method established in this study had strong specificity. Good stability, accuracy, accuracy and sensitivity, a wide range of quantification, can be used to import and export agricultural products and food components of the transgenic corn strain quantitative detection. The method can also be used as a reference for the establishment of similar quantitative detection methods for other transgenic maize lines and other transgenic crop lines.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技院茶樹生物學(xué)與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;
【基金】：公益性行業(yè)(質(zhì)檢)科研專項(xiàng)(201410014-2) 深圳市基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(JC201105190969A) 國家質(zhì)檢總局科技司項(xiàng)目(2009IK257)
【分類號(hào)】：S513

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黎裕,王天宇,石云素;轉(zhuǎn)基因玉米的研究現(xiàn)狀與未來[J];玉米科學(xué);2000年04期

2 毛磊;;轉(zhuǎn)基因玉米產(chǎn)生的毒物可滲入土壤[J];農(nóng)藥市場信息;2000年02期

3 ;美最新研究懷疑轉(zhuǎn)基因玉米抗害蟲的能力[J];世界科技研究與發(fā)展;2001年05期

4 汪重;;美發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因玉米產(chǎn)生的毒物可滲入土壤[J];農(nóng)藥市場信息;2001年04期

5 ;法美科學(xué)家為轉(zhuǎn)基因玉米“平反”[J];種子世界;2002年05期

6 馮俊揚(yáng);;墨西哥野生玉米受到轉(zhuǎn)基因玉米威脅[J];農(nóng)藥市場信息;2002年13期

7 程焉平;轉(zhuǎn)基因玉米的研究與應(yīng)用[J];黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué);2003年01期

8 王慶祥,呂桂蘭;轉(zhuǎn)基因玉米研究現(xiàn)狀及其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展對(duì)策[J];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年03期

9 陳穎,徐寶梁,蘇寧,葛毅強(qiáng),王曙光;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因玉米檢測中的應(yīng)用研究[J];作物學(xué)報(bào);2004年06期

10 龍昕;轉(zhuǎn)基因玉米應(yīng)謹(jǐn)慎種植[J];農(nóng)村新技術(shù);2005年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前7條

1 王悅冰;郎志宏;黃大f ;;利用瞬時(shí)表達(dá)體系檢測不同內(nèi)含子在轉(zhuǎn)基因玉米中的增強(qiáng)效應(yīng)[A];中國農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)會(huì)第三屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 張士龍;賀正華;黃益勤;;抗蟲、耐漬轉(zhuǎn)基因玉米種質(zhì)的創(chuàng)制[A];2012年全國玉米遺傳育種學(xué)術(shù)研討會(huì)暨新品種展示觀摩會(huì)論文及摘要集[C];2012年

3 曹修嶺;路銀貴;邸墊平;張志燕;劉賀;田蘭芝;張愛紅;張艷敬;石林丹;徐進(jìn);段西飛;韓成貴;苗洪芹;李大偉;于嘉林;;rnc70基因介導(dǎo)的高抗RBSDV轉(zhuǎn)基因玉米新品系的創(chuàng)制[A];中國植物病理學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

4 陳威;王坤;王學(xué)永;劉麗;番興明;;高賴氨酸轉(zhuǎn)基因玉米的鑒定和檢測[A];2012年全國玉米遺傳育種學(xué)術(shù)研討會(huì)暨新品種展示觀摩會(huì)論文及摘要集[C];2012年

5 張紅偉;張紅梅;鄭祖平;陳剛;王國英;譚振波;;Bt轉(zhuǎn)基因玉米的獲得及其對(duì)玉米螟的抗性分析[A];2003年全國作物遺傳育種學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

6 張紅偉;譚振波;劉欣潔;楊華;;Bt轉(zhuǎn)基因玉米株系T123抗螟性和主要農(nóng)藝性狀的鑒定分析[A];2004全國玉米種質(zhì)擴(kuò)增、改良、創(chuàng)新與分子育種學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

7 張紅偉;劉欣潔;譚振波;;Bt轉(zhuǎn)基因玉米株系T123的培育及其抗螟性和農(nóng)藝性狀的鑒定分析[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 胡軍華;孟山都：轉(zhuǎn)基因玉米影響生育缺乏依據(jù)[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2008年

2 記者 李禾;轉(zhuǎn)基因玉米可能影響生物繁殖[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

3 李學(xué)梅;法國否決轉(zhuǎn)基因玉米種植[N];中國食品報(bào);2009年

4 記者 李學(xué)梅;法權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定轉(zhuǎn)基因玉米“弊大于利”[N];新華每日電訊;2009年

5 李鵬;南非轉(zhuǎn)基因玉米大獲豐收 缺糧鄰國顧慮安全拒進(jìn)口[N];中國食品報(bào);2010年

6 記者 黃涵;法國權(quán)威機(jī)構(gòu)否定轉(zhuǎn)基因玉米致癌論[N];新華每日電訊;2012年

7 王寰鷹 黃涵;轉(zhuǎn)基因玉米毒性研究存在不足[N];糧油市場報(bào);2012年

8 夏妍;我國首次批準(zhǔn)進(jìn)口阿根廷轉(zhuǎn)基因玉米[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2013年

9 ;我國育成高營養(yǎng)含量的轉(zhuǎn)基因玉米[N];今日信息報(bào);2004年

10 本版編輯邋張之簡 徐超;法國決定暫停種植轉(zhuǎn)基因玉米[N];新華每日電訊;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 路興波;轉(zhuǎn)基因玉米環(huán)境安全性及其產(chǎn)品成分檢測技術(shù)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 赫福霞;抗蟲/耐草甘膦多價(jià)轉(zhuǎn)基因玉米的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 王柏鳳;轉(zhuǎn)基因玉米對(duì)跳蟲的影響[D];中國科學(xué)院研究生院（東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所）;2014年

4 馬金霞;非編碼基因zm401對(duì)玉米小孢子發(fā)育的影響[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 李京;新型轉(zhuǎn)基因抗草甘膦玉米的培育及轉(zhuǎn)基因玉米安全控制技術(shù)的研究[D];浙江大學(xué);2013年

6 孫鶴;連接肽2A和LP4/2A在玉米中的剪切分析及抗蟲耐除草劑轉(zhuǎn)基因玉米的獲得[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

7 白云鳳;利用不同策略獲得抗SCMV轉(zhuǎn)基因玉米的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊文霞;赤霉菌Gibberella sp.F75來源的α-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)基因玉米的培育[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 任珍靜;轉(zhuǎn)mAM79基因玉米的獲得及草甘膦抗性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 王兆明;轉(zhuǎn)基因玉米檢測的內(nèi)參基因篩選與鑒定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 楊麗麗;Bt-mCry1Ac基因在抗蟲轉(zhuǎn)基因玉米中的表達(dá)及其對(duì)斑馬魚毒性效應(yīng)的初步研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 王江;兩種代表性生物對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米響應(yīng)的生物學(xué)特性研究[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

6 王清華;轉(zhuǎn)基因玉米BT11和T-25品系環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢測方法的建立[D];大連工業(yè)大學(xué);2014年

7 趙思楠;轉(zhuǎn)基因玉米“雙抗12-6”草甘膦耐受性、生存競爭力及其對(duì)雜草多樣性影響的研究[D];浙江大學(xué);2016年

8 劉凱;轉(zhuǎn)基因玉米對(duì)土壤微生物的影響[D];山西大學(xué);2016年

9 宋紅霞;抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米的研究[D];山西大學(xué);2016年

10 連慶;我國轉(zhuǎn)基因玉米產(chǎn)業(yè)化面臨的主要問題及對(duì)策[D];對(duì)外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1564945