本文選題：食管鱗狀上皮細胞癌　切入點：hsa-miR-328　出處：《鄭州大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景食管癌是中國常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率在中國排在惡性腫瘤的第五位。其特點是預后差,死亡率高,死亡率居中國惡性腫瘤的第四位。食管癌的病理類型主要為腺癌和鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。在我國,ESCC占食管癌的90%。盡管多項研究對于ESCC的發(fā)病機制進行了廣泛的探討,但是其發(fā)生發(fā)展機制目前仍不清楚。食管癌患者就診時多處于中晚期,相當部分的病人已不能手術治療,總的五年生存率非常低。因此,深入研究ESCC的發(fā)生發(fā)展機制,對于提高ESCC的診斷和預后具有重要的意義。微小RNA(miRNA)含有21~25個核苷酸,是一類高度保守的內源性非編碼小分子RNA,與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。miRNA的作用機制主要是與靶m RNA的3’非編碼區(qū)(3'-untranslated region,3'-UTR)或5’非編碼區(qū)(5'-untranslated region,5'-UTR)結合,最終負性調控靶基因的表達。Hsa-miR-328來源于人染色體16q22.1,可調節(jié)多種腫瘤細胞的增殖與侵襲轉移,與多種腫瘤如非小細胞肺癌、胃癌、前列腺癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)膠質瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關系。但是,hsa-miR-328在ESCC中的表達及其對ESCC發(fā)生發(fā)展的影響未見報道。研究目的探討hsa-miR-328及其靶基因磷脂酶Cε1(Phospholipase C epsilon 1,PLCE1)在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其相關機制。研究方法:1、實時熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR)技術檢測并比較了hsa-miR-328在82例ESCC患者癌組織與配對的癌旁組織中的表達,分析了hsa-miR-328的表達與ESCC患者預后的關系,統(tǒng)計了hsa-miR-328與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度和TNM分期之間的關系。2、QRT-PCR技術檢測了hsa-miR-328在不同食管上皮細胞系中的表達,增殖實驗、流式細胞術和transwell分別檢測了hsa-miR-328對人食管鱗癌細胞EC109和EC9706增殖、凋亡、遷移和侵襲功能的影響。QRT-PCR技術檢測了hsa-miR-328對EC109和EC9706細胞上皮間質轉化標記物表達的影響。小管形成實驗檢測了hsa-miR-328在EC109和EC9706細胞的表達對人臍靜脈內皮細胞HUVEC小管形成的影響,增殖實驗和transwell分別檢測了hsa-miR-328在EC109和EC9706細胞的表達對HUVEC細胞增殖和遷移功能的影響。3、采用生物信息學方法、免疫印跡和QRT-PCR預測并鑒定了hsa-miR-328的靶點。采用細胞增殖實驗、流式細胞術和transwell觀察了PLCE1對EC109和EC9706細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲功能的影響。4、采用QRT-PCR和免疫組織化學檢測并比較了PLCE1在82例ESCC患者癌組織與配對的癌旁組織中的表達,分析了PLCE1的表達與ESCC患者預后的關系,統(tǒng)計了PLCE1與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度和TNM分期之間的相關性,分析了癌組織與癌旁組織中hsa-miR-328與PLCE1表達的相關性。研究結果:1、與配對的癌旁組織比較,hsa-miR-328在食管癌組織中的表達顯著降低(P0.05);64.6%的患者中,hsa-miR-328在癌組織中的表達低于配對的癌旁組織,35.4%的患者中,hsa-miR-328在癌組織中的表達高于配對的癌旁組織;Hsa-miR-328表達上調患者(hsa-miR-328在癌組織中的表達高于配對的癌旁組織)的生存期顯著高于hsa-miR-328表達下調患者(hsa-miR-328在癌組織中的表達低于配對的癌旁組織)(P0.05);Hsa-miR-328的表達與性別、年齡和腫瘤位置無相關性,與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度和TNM分期呈負相關(P0.05)。2、同人正常食管上皮細胞HEEC比較,EC109和EC9706中hsa-miR-328的表達顯著降低(P0.05);慢病毒轉染LV-miR-328顯著增加ESCC細胞內hsa-miR-328的表達(P0.05),慢病毒轉染LV-anti-miR-328顯著降低ESCC細胞內hsa-miR-328的表達(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組細胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著降低(P0.05),LV-anti-miR-328組細胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05);凋亡檢測表明,同LV-NC組比較,LV-miR-328組的細胞凋亡比例顯著增加(P0.05),LV-anti-miR-328組的細胞凋亡比例顯著降低(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組和LV-anti-miR-328組細胞的E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白的表達均無顯著改變(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組和LV-anti-miR-328組的HUVEC細胞的小管形成能力、增殖能力和遷移能力無顯著改變(P0.05)。3、生物信息學方法預測PLCE1是hsa-miR-328的潛在靶點;雙熒光素酶檢測、免疫印跡和QRT-PCR結果表明,PLCE1是hsa-miR-328的靶點;成功構建了p CDNA3/PLCE1高表達載體;同對照組比較,p CDNA3/PLCE1組細胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05),細胞凋亡比例顯著降低(P0.05);同LV-miR-328組比較,LV-miR-328+p CDNA3/PLCE1組細胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05),細胞凋亡比例顯著降低(P0.05)。4、與配對的癌旁組織比較,PLCE1在食管癌組織中的表達顯著增加(P0.05);62.2%的患者中,PLCE1在癌組織中的表達高于配對的癌旁組織,37.8%的患者中,PLCE1在癌組織中的表達低于配對的癌旁組織;PLCE1表達上調患者(PLCE1在癌組織中的表達高于配對的癌旁組織)的生存期顯著低于PLCE1表達下調患者(PLCE1在癌組織中的表達低于配對的癌旁組織)(P0.05);PLCE1的表達與同性別、年齡、腫瘤位置和分化程度無相關性,與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期呈正相關(P0.05);在ESCC患者的癌組織與癌旁組織中,hsa-miR-328與PLCE1的表達呈負相關(P0.01)。結論:ESCC癌組織中hsa-miR-328的表達降低,可增加PLCE1的表達,繼而促進ESCC細胞的增殖、遷移和侵襲,抑制ESCC細胞的凋亡,這可能是ESCC發(fā)生發(fā)展的機制之一。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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相關博士學位論文 前1條

1 韓娜;Hsa-miR-328及其靶基因PLCE1在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制探討[D];鄭州大學;2016年

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本文編號：1562322