本文關(guān)鍵詞： NeuroD 基因克隆 生物信息學(xué)分析 pIRES-AcGFP-ND　出處：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：克隆大鼠NeuroD2基因,旨在構(gòu)建p IRES2-Ac GFP1-ND2真核表達(dá)載體并檢測(cè)其在小鼠MSCs中的表達(dá)。采用RTPCR技術(shù)克隆大鼠NeuroD2基因,分析該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能域、細(xì)胞定位及與其他物種同源性;構(gòu)建pIRES2-AcGFP1-ND2表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs);采用Real-time PCR、免疫熒光及Western blot技術(shù)檢測(cè)重組質(zhì)粒在小鼠MSCs中的表達(dá)。結(jié)果表明,大鼠NeuroD2基因CDS區(qū)全長(zhǎng)1 149 bp,共編碼382個(gè)氨基酸,屬于b HLH家族,二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋和無(wú)規(guī)卷曲為主,空間結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)近似"螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)"結(jié)構(gòu),主要分布在細(xì)胞核,氨基酸序列與家鼠(99%)、羅猴(98%)、人(97.7%)同源性較高;Real-time PCR結(jié)果表明轉(zhuǎn)染組NeuroD2基因表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P0.05);免疫熒光及Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組NeuroD2蛋白表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P0.05)。成功克隆大鼠NeuroD2基因并構(gòu)建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表達(dá)載體。
[Abstract]:Rat NeuroD2 gene was cloned to construct the eukaryotic expression vector of p IRES2-Ac GFP1-ND2 and to detect its expression in mouse MSCs. The rat NeuroD2 gene was cloned by RTPCR technique. The protein structure, functional domain, cellular location and homology with other species were analyzed. PIRES2-AcGFP1-ND2 expression vector was constructed and transfected into mouse bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs). The expression of the recombinant plasmid in mouse MSCs was detected by Real-time PCR, immunofluorescence and Western blot. The results showed that the CDS region of rat NeuroD2 gene was 1 149 BP, encoding 382 amino acids. It belongs to b HLH family. The secondary structure is 偽 -helix and random crimp. The spatial structure is similar to "helix-ring-helix HLH" structure, mainly distributed in the nucleus. The results of real-time PCR showed that the expression of NeuroD2 gene in the transfected group was significantly higher than that in the control group, and the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. The results of immunofluorescence and Western blot showed that the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. Rat NeuroD2 gene was cloned successfully and the eukaryotic expression vector of pIRES2-AcGFP1-ND2 was constructed.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院骨科研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81470087) 全軍十二五面上項(xiàng)目(CWS11C228)
【分類號(hào)】：Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳昌杰,趙莉;人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[J];中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志;2004年06期

2 何煒,張朝,章茜,趙國(guó)強(qiáng),董子明;真核表達(dá)載體pcDNA3.1-MAGE-1的構(gòu)建[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年04期

3 彭仕芳;傅蕾;譚德明;侯周華;;人可溶性腫瘤壞死因子受體1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2007年03期

4 孟慶文,曹素芳,李媛,金紅,于康震;綠色熒光蛋白基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)檢測(cè)[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年S1期

5 程蓓,葉大風(fēng),謝幸,陳懷增,呂衛(wèi)國(guó);人白細(xì)胞介素7基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年03期

6 李慧卿,韓金祥,李騰國(guó);骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2003年02期

7 吳砂,張昌菊,葉慶,沈關(guān)心;次級(jí)淋巴組織趨化因子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白質(zhì)表達(dá)的鑒定[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

8 劉娟,孫永濤,李光玉,劉秋平,翟嵩,王福祥;人中性粒細(xì)胞多肽1真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2004年10期

9 徐潔杰,張偉娟,王浩明,胡火珍;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年02期

10 陳麗紅;劉景豐;方航榮;邱明鏈;;pIRES2-EGFP-hIL-10真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2009年34期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 周儀華;王耀晟;何力鵬;鮑曉明;黃曉;程曉曙;;可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1真核表達(dá)載體pEGFP-N1/sflt-1的構(gòu)建及在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

2 張金陽(yáng);耿陽(yáng);顏焰;廖敏;周繼勇;;狂犬病毒磷蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在成神經(jīng)瘤細(xì)胞上的表達(dá)[A];第3屆全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 孫立;田曉濱;楊述華;胡如印;汪雷;陸延盛;張宇坤;傅德皓;;人骨形成蛋白~2真核表達(dá)載體的構(gòu)建和體外表達(dá)[A];2009第一屆貴州骨科論壇論文匯編[C];2009年

4 徐潔;崔彬;焦玉蓮;游力;張捷;劉曉雯;曲蕓蕓;朱敏;孫新平;趙躍然;;人HMGB1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)[A];山東生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

5 黃柏勝;鄔力祥;劉發(fā)益;楊麗娟;彭志宏;;DORA基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];湖南省首屆生理—藥理科學(xué)青年論壇論文摘要匯編[C];2009年

6 陳焰;賈柳萍;田德英;黃臘平;;HEV ORF3真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及生物學(xué)功能初探[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第九次感染病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 楊德業(yè);周希;黃曉燕;陳長(zhǎng)曦;陳必成;龔永生;;Pax-8基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其功能研究[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

8 焦平;馬杰;周余來(lái);王毅;宿曉云;;拼接法構(gòu)建人分泌型Klotho真核表達(dá)載體[A];增強(qiáng)自主創(chuàng)新能力 促進(jìn)吉林經(jīng)濟(jì)發(fā)展——啟明杯·吉林省第四屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

9 王丙云;陳勝鋒;高健潛;陳志勝;計(jì)慧琴;;雞Mx蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

10 紀(jì)元;宋奇;王罡琦;歐陽(yáng)紅生;唐小春;;Lp-PLA2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其生物學(xué)功能研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張守純;p16真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 廖新華;Neuritin轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建與鑒定[D];石河子大學(xué);2015年

2 m景軍;傳染性法氏囊病病毒VP4和VP5蛋白基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及對(duì)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 李婷;重組人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)蛋白19的表達(dá)與初步鑒定[D];河北北方學(xué)院;2016年

4 徐洪龍;人LL-37基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在細(xì)胞中的表達(dá)與鑒定[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 呂婷婷;pHsa-miR16-shRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建、體外轉(zhuǎn)錄及其活性的鑒定[D];華中科技大學(xué);2009年

6 崔濤;腫瘤候選基因PRR11原核、真核表達(dá)載體構(gòu)建、細(xì)胞定位及功能的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

7 劉占英;人MGL真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在細(xì)胞內(nèi)定位的研究[D];東北師范大學(xué);2014年

8 鐘利;甲型流感病毒NP基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫效果研究[D];四川大學(xué);2007年

9 徐潔杰;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[D];四川大學(xué);2005年

10 黃潔;綠色熒光蛋白標(biāo)記的乙肝病毒全基因組真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)分析[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：1555897