本文關(guān)鍵詞： 半滑舌鰨 RasGRP 基因克隆 病源感染 基因表達(dá)　出處：《中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)》2016年04期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide Releasing Protein 3)是一種鳥(niǎo)苷酸交換蛋白,差異表達(dá)的Ras GRP3蛋白在疾病發(fā)生和固有免疫中發(fā)揮著重要作用。為了探究半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)Ras GRP3基因組成、組織表達(dá)及免疫應(yīng)答特征,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室半滑舌鰨轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)獲得的部分Ras GRP3序列,采用RACE(Rapid-Amplification of c DNA Ends)技術(shù),克隆了Ras GRP3基因的全長(zhǎng),將測(cè)序結(jié)果進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)和同源性分析:半滑舌鰨Ras GRP3基因全長(zhǎng)2756 bp,ORF(Open Reading Frame)長(zhǎng)度為2244 bp,編碼747個(gè)氨基酸;推導(dǎo)的半滑舌鰨Ras GRP3氨基酸序列與其他魚(yú)類(lèi)的Ras GRP3氨基酸序列相似性較高,是同源基因。采用q RT-PCR(Quantitative Real-Time PCR)方法對(duì)Ras GRP3基因在健康半滑舌鰨13種組織、鰻弧菌(Vibro anguillarum)感染后不同時(shí)間點(diǎn)的6種免疫組織及LPS、PGN、WGP和poly I:C 4種病原模擬物處理的半滑舌鰨外周血淋巴細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)中的表達(dá)特征進(jìn)行分析:Ras GRP3基因在健康半滑舌鰨13種組織中均有表達(dá),其中在性腺中表達(dá)量最高,其次是肝、腦和脾,在血液中表達(dá)量最低;Ras GRP3基因在鰻弧菌感染后半滑舌鰨6種免疫組織中都表現(xiàn)出不同的表達(dá)趨勢(shì),其中肝和鰓中上調(diào)趨勢(shì)明顯,6 h比0 h上調(diào)表達(dá)倍數(shù)分別為3倍和30倍,在腸、脾、頭腎和血液中6 h都出現(xiàn)了下調(diào)表達(dá);Ras GRP3在4種病原模擬物處理的半滑舌鰨外周血淋巴細(xì)胞中整體上調(diào)表達(dá),在PGN和poly I:C這2種病原模擬物刺激后表達(dá)趨勢(shì)出現(xiàn)明顯上調(diào),在PGN刺激后24 h比0 h上調(diào)表達(dá)倍數(shù)為13倍,在poly I:C刺激后6 h比0 h上調(diào)表達(dá)8倍。結(jié)果表明,Ras GRP3基因參與了半滑舌鰨的免疫應(yīng)答過(guò)程,可能在免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。
[Abstract]:RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide Releasing Protein 3 (RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide Releasing Protein 3) is a guanosine acid exchange protein. The differentially expressed RasGRP3 protein plays an important role in the pathogenesis and innate immunity of Cynoglossus semilaevis. In order to investigate the gene composition, tissue expression and immune response of Cynoglossus semilaevis)Ras GRP3, RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide Releasing Protein 3 plays an important role in the pathogenesis of disease and innate immunity. Based on the partial Ras GRP3 sequence obtained from transcriptome data of Cynoglossus semilaevis in our laboratory, the full length of Ras GRP3 gene was cloned by RACE(Rapid-Amplification of c DNA end technique. The results of amino acid sequence alignment and homology analysis were as follows: the length of Ras GRP3 gene of Cynoglossus semilaevis was 2 244 BP, encoding 747 amino acids. The deduced amino acid sequence of Ras GRP3 was similar to that of other fishes, and it was a homologous gene. Using Q RT-PCR(Quantitative Real-Time PCR, the Ras GRP3 gene was detected in 13 healthy tissues of Cynoglossus semilaevis. Expression characteristics of six kinds of immune tissues at different time points after Vibro anguillarum infection and peripheral blood lymphocytes of Cynoglossus semilaevis treated with LPSG-PGNWGP and poly I: C at different time points. The expression of Cynoglossus glossus was found in 13 kinds of tissues. The expression of Ras GRP3 gene was the highest in gonads, followed by liver, brain and spleen. The lowest expression of Ras GRP3 gene in blood was observed in six immune tissues of Cynoglossus semilaevis after infection with Vibrio anguillaris. The upregulation of liver and Gill was 3 times and 30 times higher than that of 0 h respectively in intestine and spleen. The expression of Ras GRP3 was up-regulated in peripheral blood lymphocytes of Cynoglossus semilaevis treated with four pathogenetic mimics at 6 h. The expression trend of Ras GRP3 was up-regulated after stimulation of PGN and poly I: C, respectively. The expression of Ras GRP3 was 13 times higher than 0 h after PGN stimulation and 8 times higher at 6 h than 0 h after poly I: C stimulation. The results showed that Ras GRP3 gene was involved in the immune response of Cynoglossus semilaevis. It may play an important role in immune regulation.
【作者單位】： 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;青島海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室;大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31572644) 國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目(2012AA10A401-4) 鰲山科技創(chuàng)新計(jì)劃(2015ASKJ02-03)
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4

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本文編號(hào)：1551050