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  本文關(guān)鍵詞：rd29A啟動(dòng)子的克隆及提高煙草抗逆性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《東北林業(yè)大學(xué)》 2011年

西伯利亞蓼胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白和谷氨酰胺合成酶基因共轉(zhuǎn)化煙草的抗逆性分析

李揚(yáng)  

【摘要】：植物胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白(1ate embryogenesis abundant protein, LEA)是胚胎發(fā)生后期在種子中大量積累的一種蛋白質(zhì)。高親水性和強(qiáng)的熱穩(wěn)定性以及缺少半胱氨酸殘基、色氨酸殘基是LEA蛋白家族的普遍結(jié)構(gòu)特征。谷氨酰胺合成酶(Glutamin synthetase,GS)是第一個(gè)從植物中分離純化和鑒定的酶,也是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的能將植物無機(jī)鹽形式的氨催化同化成有機(jī)氮形式的酶。在谷氨酸合成酶的聯(lián)合作用下,GS將植物吸收的無機(jī)態(tài)氨轉(zhuǎn)變成有機(jī)形式的谷氨酰胺(G1n)和谷氨酸(G1u),在高等植物體內(nèi)含氮有機(jī)物的生物全盛中作為N的供體。本研究從鹽脅迫下的西伯利亞蓼cDNA文庫中獲得的LEA和GS兩個(gè)基因,分別構(gòu)建了LEA單基因、GS單基因及LEA-GS雙基因植物單價(jià)和雙價(jià)表達(dá)載體,成功獲得了轉(zhuǎn)單、雙價(jià)基因煙草,并進(jìn)行了相關(guān)的分子生物學(xué)鑒定,分析了轉(zhuǎn)基因煙草的抗鹽、抗堿和抗干旱能力。主要研究成果如下： 1、對(duì)西伯利亞蓼LEA和GS基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析表明,LEA基因cDNA全長686 bp,其中開放讀碼框?yàn)?53 bp,共編碼150個(gè)氨基酸,屬于穩(wěn)定蛋白。GS基因cDNA全長1273 bp,其中開放讀碼框?yàn)?071 bp,為非穩(wěn)定蛋白。熒光定量PCR分析顯示,在3％NaHC03脅迫下,LEA基因在葉和地下莖中最大表達(dá)量出現(xiàn)在48 h,莖中最大表達(dá)量出現(xiàn)在72 h；GS基因在葉中最大表達(dá)量出現(xiàn)在8 h,莖中最大表達(dá)量出現(xiàn)在72h,而地下莖中各時(shí)間段的表達(dá)量均低于脅迫前。 2、構(gòu)建了植物單價(jià)表達(dá)載體pROKⅡ-LEA.pROKⅡ-GS和雙價(jià)表達(dá)載體pROKⅡ-LEA-GS，并轉(zhuǎn)入到煙草中,PCR和RT-PCR等方法驗(yàn)證三個(gè)基因已經(jīng)在煙草中成功表達(dá)。 3、選取3個(gè)轉(zhuǎn)基因煙草株系,分析逆境脅迫下的非轉(zhuǎn)基因和轉(zhuǎn)基因煙草的MDA含量、SOD活性、POD活性以及可溶性蛋白含量的變化。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)LEA-GS基因的過量表達(dá)增強(qiáng)了煙草抗NaCl.NaHC03和PEG6000脅迫傷害的能力。轉(zhuǎn)基因組培幼苗的耐性分析表明,PEG6000干旱脅迫對(duì)幼苗傷害比較大。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：S572;Q943.2
【目錄】：

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李麗婭;鐵（Ⅲ）螯合物還原酶在植物鐵代謝中的作用研究[D];哈爾濱師范大學(xué);2011年

2 袁媛;植物基因安全轉(zhuǎn)化體系關(guān)鍵技術(shù)的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 劉關(guān)君;EST技術(shù)分析西伯利亞蓼耐鹽機(jī)制及耐鹽相關(guān)基因克隆[D];東北林業(yè)大學(xué);2007年

4 司婧;高山離子芥冷調(diào)節(jié)基因CbCOR15提高轉(zhuǎn)基因煙草抗寒性的研究[D];蘭州大學(xué);2009年

5 毛建軍;稻瘟菌激活蛋白基因pemG1在水稻和煙草中的表達(dá)及功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

6 郎志宏;蘇云金芽孢桿菌cry8Ca2基因的活性分析及在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

7 陳小芳;東方山羊豆抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆和相關(guān)研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 唐前君;雙生病毒外殼蛋白和傳毒相關(guān)蛋白基因介導(dǎo)的病毒抗性研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 顧青;幽門螺桿菌抗原UreB的基因工程及免疫原性研究[D];浙江大學(xué);2005年

10 陳小平;玉米種子特異性表達(dá)基因Zpu1和brittle2啟動(dòng)子的分離與功能分析[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李揚(yáng);西伯利亞蓼胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白和谷氨酰胺合成酶基因共轉(zhuǎn)化煙草的抗逆性分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

2 楊春雪;西伯利亞蓼PsPGIP基因的克隆及功能分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

3 秦楠;蠟梅病程相關(guān)蛋白基因CpPR-1的克隆及功能初步分析[D];西南大學(xué);2011年

4 鄭卿;抗Ⅰ型糖尿病基因轉(zhuǎn)化煙草、番茄的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2010年

5 曲春浦;西伯利亞蓼銅伴侶蛋白與銅鋅超氧化物歧化酶基因共轉(zhuǎn)化煙草的抗鹽性分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

6 劉春;西柏利亞蓼PsGSTU1、PsCSase1、PsnsLTP基因的抗逆功能分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

7 曲東;馬鈴薯Rubisco活化酶啟動(dòng)子功能分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

8 王心宇;番茄DR8基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)化煙草及其定性研究[D];重慶大學(xué);2009年

9 張茂迎;玉米B組促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）基因ZmMKK3的分離及功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 曾光;苜蓿抗逆基因的cDNA克隆和轉(zhuǎn)基因煙草功能的初步驗(yàn)證[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：rd29A啟動(dòng)子的克隆及提高煙草抗逆性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：154260