本文關(guān)鍵詞： 三七 根腐病 病程相關(guān)蛋白 原核表達(dá)　出處：《中國中藥雜志》2017年16期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：在轉(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ)上,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù),從三七主根中分離到三七病程相關(guān)蛋白10(pathogensis related protein 10,PR10)基因,命名為PnPR10-2,測序結(jié)果表明該序列長465 bp,編碼154個氨基酸。氨基酸序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育樹分析發(fā)現(xiàn),PnPR10-2與人參的PR10-2蛋白同源性最高,具有典型的病程相關(guān)蛋白Bet v I保守結(jié)構(gòu)域。構(gòu)建了重組載體pET32a(+)-PnPR10-2,在宿主菌Escherichia coli BL21中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,優(yōu)化誘導(dǎo)條件,PnPR10-2融合蛋白在E.coli BL21中以可溶性和包涵體蛋白2種形式大量表達(dá)。純化上清中的重組蛋白,運用紙片法分析純化重組蛋白的體外抑菌活性,其對三七根腐病病菌腐皮鐮刀菌Fusarium solani和壞損柱孢菌Cylindrocarpon destructans具有一定的抑制作用,猜測該基因可能參與了三七抗根腐病的防御反應(yīng)。
[Abstract]:On the basis of transcriptome sequencing, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) technique was used to isolate the pathogenesis-related protein 10pathogensis related protein (PR10) gene from the main root of Panax notoginseng (Panax notoginseng). PnPR10-2 was named as PnPR10-2.The result of sequencing showed that the sequence was 465bpand encoded 154 amino acids. The homology of amino acid sequence and phylogenetic tree showed that PnPR10-2 had the highest homology with ginseng PR10-2 protein. The recombinant vector pET32a (PnPR10-2) was constructed to induce the expression of fusion protein in Escherichia coli BL21. PnPR10-2 fusion protein was expressed in E. coli BL21 in two forms: soluble protein and inclusion body protein. The recombinant protein in supernatant was purified. The antibacterial activity of purified recombinant protein in vitro was analyzed by disk method. It has a certain inhibitory effect on Fusarium solani and Cylindrocarpon destructans of Panax notoginseng root rot. It is speculated that this gene may be involved in the defense response of Panax notoginseng against root rot.
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;云南省三七資源可持續(xù)利用重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31560351,31260297)
【分類號】：S435.672

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本文編號：1532025