本文關(guān)鍵詞： 肺纖維化 博來霉素 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 人肝細(xì)胞生長因子 基因治療　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:觀察人肝細(xì)胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化大鼠模型的影響。方法:清潔級雄性、7周齡,體重為200~250g的F344大鼠140只,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將大鼠隨機(jī)分為4組(n=35),陰性對照(Control)組,博來霉素(BLM)組,空載體慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP-MSCs)組和人肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(h HGF-MSCs)組。Control組經(jīng)氣管內(nèi)霧化吸入0.2ml無菌生理鹽水,BLM組、EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組均經(jīng)氣管內(nèi)霧化吸入0.2ml博來霉素(5 mg/kg)建立動(dòng)物造模(第0天)。造模2天后(第3天),Control組和BLM組大鼠經(jīng)頸外靜脈注射DMEM 1ml。EGFP-MSCs組大鼠經(jīng)頸外靜脈注射含5×105個(gè)EGFP-MSCs的DMEM 1ml。h HGF-MSCs組注入相同數(shù)量的h HGF-MSCs。各組隨機(jī)抽取15只大鼠進(jìn)行生存分析。各組隨機(jī)抽取5只大鼠行冰凍切片觀察造模28天肺組織內(nèi)細(xì)胞定植情況。于第7天、第14天、第28天分批處死各組大鼠,每組5只。具體檢測指標(biāo)為觀察大鼠的一般情況并記錄體重,留取肺組織行HE、Masson染色觀察炎癥和纖維化程度,Ashcroftscore評分評價(jià)病理形態(tài),堿水解法測定肺組織羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,ELISA法測定肺組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血清內(nèi)源性鼠肝細(xì)胞生長因子(rat hepatocyte growth factor,r HGF)、外源性人肝細(xì)胞生長因子(human hepatocyte growth factor,h HGF)和血清肺表面蛋白A(surface protein A,SP-A),免疫組化檢測肺組織TGF-β1和SP-A表達(dá)。結(jié)果:(1)EGFP-MSCs組及h HGF-MSCs組肺內(nèi)可見大量綠色熒光細(xì)胞分布;BLM組未見綠色熒光細(xì)胞分布。(2)大鼠血清ELISA結(jié)果顯示h HGF-MSCs組檢測出h HGF蛋白,其余各組均未檢測出h HGF蛋白。與BLM組相比,EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組r HGF蛋白水平在第7天無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),第14、28天顯著增加(p0.05);h HGF-MSCs組第14、28天較EGFP-MSCs組明顯增加(p0.01,p0.05)。(3)與BLM組相比,EGFP-MSCs、h HGF-MSCs組大鼠體重下降程度較少(p0.01);與EGFP-MSCs組相比,h HGF-MSCs組大鼠在7d、14d無差異,28d體重下降程度減輕(p0.01)。(4)BLM組大鼠死亡率率明顯增加,主要集中在14d前;EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組大鼠的存活率較BLM組明顯增加(p0.05),且h HGF-MSCs組大鼠存活時(shí)間較長。(5)與BLM組相比,EGFP-MSCs組、h HGF-MSCs組大鼠肺組織炎癥程度在各時(shí)間點(diǎn)減輕,h HGF-MSCs組明顯減輕;與BLM組相比,EGFP-MSCs組、h HGF-MSCs組大鼠肺組織綠染沉積第7天無明顯差異,第14、28天減輕,h HGF-MSCs明顯減輕。與BLM組相比,EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組Ashcroft score評分第7天無明顯差異(p0.05);第14、28天EGFP-MSCs組下降(p0.05),h HGF-MSCs組明顯下降(p0.05)。(6)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織HYP含量在各時(shí)間點(diǎn)明顯降低(p0.01,p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織HYP含量在各時(shí)間點(diǎn)較EGFP-MSCs組明顯下降(p0.01)。(7)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織免疫組織化學(xué)TGF-β1表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)明顯下降(p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織TGF-β1表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)較EGFP-MSCs組明顯下降(p0.05)。與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織免疫組織化學(xué)染色SP-A表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)明顯增加(p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織SP-A表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)較EGFP-MSCs組明顯增加(p0.05)。(8)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織勻漿TGF-β1水平和血清SP-A水平在各時(shí)間點(diǎn)明顯降低(p0.01,p0.05);h HGF-MSCs組大鼠肺組織勻漿TGF-β1水平在各時(shí)間點(diǎn)較EGFP-MSCs組降低(p0.05)。結(jié)論:(1)通過氣管內(nèi)霧化吸入博來霉素后成功建立肺纖維化大鼠模型;(2)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)頸外靜脈移植后可在肺纖維化大鼠肺內(nèi)長期定植;(3)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植改善肺纖維化大鼠一般情況、肺組織病理學(xué)改變、膠原沉積和延長大鼠生存時(shí)間;人肝細(xì)胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞療效更顯著。
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本文編號：1526723