本文關鍵詞： 肺纖維化 博來霉素 骨髓間充質干細胞 人肝細胞生長因子 基因治療　出處：《福建醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:觀察人肝細胞生長因子基因修飾的骨髓間充質干細胞對博來霉素誘導肺纖維化大鼠模型的影響。方法:清潔級雄性、7周齡,體重為200~250g的F344大鼠140只,采用隨機數字表法,將大鼠隨機分為4組(n=35),陰性對照(Control)組,博來霉素(BLM)組,空載體慢病毒轉導的骨髓間充質干細胞(EGFP-MSCs)組和人肝細胞生長因子基因轉導的骨髓間充質干細胞(h HGF-MSCs)組。Control組經氣管內霧化吸入0.2ml無菌生理鹽水,BLM組、EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組均經氣管內霧化吸入0.2ml博來霉素(5 mg/kg)建立動物造模(第0天)。造模2天后(第3天),Control組和BLM組大鼠經頸外靜脈注射DMEM 1ml。EGFP-MSCs組大鼠經頸外靜脈注射含5×105個EGFP-MSCs的DMEM 1ml。h HGF-MSCs組注入相同數量的h HGF-MSCs。各組隨機抽取15只大鼠進行生存分析。各組隨機抽取5只大鼠行冰凍切片觀察造模28天肺組織內細胞定植情況。于第7天、第14天、第28天分批處死各組大鼠,每組5只。具體檢測指標為觀察大鼠的一般情況并記錄體重,留取肺組織行HE、Masson染色觀察炎癥和纖維化程度,Ashcroftscore評分評價病理形態(tài),堿水解法測定肺組織羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,ELISA法測定肺組織轉化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血清內源性鼠肝細胞生長因子(rat hepatocyte growth factor,r HGF)、外源性人肝細胞生長因子(human hepatocyte growth factor,h HGF)和血清肺表面蛋白A(surface protein A,SP-A),免疫組化檢測肺組織TGF-β1和SP-A表達。結果:(1)EGFP-MSCs組及h HGF-MSCs組肺內可見大量綠色熒光細胞分布;BLM組未見綠色熒光細胞分布。(2)大鼠血清ELISA結果顯示h HGF-MSCs組檢測出h HGF蛋白,其余各組均未檢測出h HGF蛋白。與BLM組相比,EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組r HGF蛋白水平在第7天無統(tǒng)計學差異(p0.05),第14、28天顯著增加(p0.05);h HGF-MSCs組第14、28天較EGFP-MSCs組明顯增加(p0.01,p0.05)。(3)與BLM組相比,EGFP-MSCs、h HGF-MSCs組大鼠體重下降程度較少(p0.01);與EGFP-MSCs組相比,h HGF-MSCs組大鼠在7d、14d無差異,28d體重下降程度減輕(p0.01)。(4)BLM組大鼠死亡率率明顯增加,主要集中在14d前;EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組大鼠的存活率較BLM組明顯增加(p0.05),且h HGF-MSCs組大鼠存活時間較長。(5)與BLM組相比,EGFP-MSCs組、h HGF-MSCs組大鼠肺組織炎癥程度在各時間點減輕,h HGF-MSCs組明顯減輕;與BLM組相比,EGFP-MSCs組、h HGF-MSCs組大鼠肺組織綠染沉積第7天無明顯差異,第14、28天減輕,h HGF-MSCs明顯減輕。與BLM組相比,EGFP-MSCs組和h HGF-MSCs組Ashcroft score評分第7天無明顯差異(p0.05);第14、28天EGFP-MSCs組下降(p0.05),h HGF-MSCs組明顯下降(p0.05)。(6)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織HYP含量在各時間點明顯降低(p0.01,p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織HYP含量在各時間點較EGFP-MSCs組明顯下降(p0.01)。(7)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織免疫組織化學TGF-β1表達在各時間點明顯下降(p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織TGF-β1表達在各時間點較EGFP-MSCs組明顯下降(p0.05)。與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織免疫組織化學染色SP-A表達在各時間點明顯增加(p0.05);h HGF-MSCs大鼠肺組織SP-A表達在各時間點較EGFP-MSCs組明顯增加(p0.05)。(8)與BLM組相比,EGFP-MSCs組大鼠肺組織勻漿TGF-β1水平和血清SP-A水平在各時間點明顯降低(p0.01,p0.05);h HGF-MSCs組大鼠肺組織勻漿TGF-β1水平在各時間點較EGFP-MSCs組降低(p0.05)。結論:(1)通過氣管內霧化吸入博來霉素后成功建立肺纖維化大鼠模型;(2)骨髓間充質干細胞經頸外靜脈移植后可在肺纖維化大鼠肺內長期定植;(3)骨髓間充質干細胞移植改善肺纖維化大鼠一般情況、肺組織病理學改變、膠原沉積和延長大鼠生存時間;人肝細胞生長因子基因修飾的骨髓間充質干細胞療效更顯著。
[Abstract]:鐩殑:瑙傚療浜鴻倽緇嗚優(yōu)鐢熼暱鍥犲瓙鍩哄洜淇グ鐨勯楂撻棿鍏呰川騫茬粏鑳?yōu)瀵瑰崥鏉ラ湁绱犺瀵艰偤绾ぞl村寲澶ч紶妯″瀷鐨勫獎鍝，

本文編號：1526723