本文關(guān)鍵詞： 木糖氧化產(chǎn)堿菌DL- 含銅亞硝酸還原酶(Cu NiR) 克隆 表達(dá) 純化　出處：《食品工業(yè)科技》2017年14期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：該研究通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法從木糖氧化產(chǎn)堿菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因組DNA中成功克隆含銅亞硝酸還原酶基因。PCR測(cè)序表明該基因全長(zhǎng)1083個(gè)核苷酸,編碼360個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)其理論分子質(zhì)量約38.924 k Da,等電點(diǎn)(p I)4.83,命名為Cu NiR(Genbank登錄號(hào)KX674378)。結(jié)構(gòu)域分析該蛋白編碼區(qū)包含信號(hào)肽,1個(gè)銅離子結(jié)合位點(diǎn),1個(gè)氧化還原酶催化域。將Cu NiR基因構(gòu)建到p ET22b載體,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)顯示目的蛋白可溶表達(dá)。利用鎳柱親和層析純化重組蛋白,酶活檢測(cè)顯示比活力為123.82 U/mg,為后期含銅亞硝酸還原酶(Cu NiR)的生化性質(zhì)表征奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, the gene containing copper nitrite reductase was cloned successfully from the genomic DNA of Achromobacter xylosoxidans DL-1 by polymerase chain reaction (PCR). The results showed that the gene was 1083 nucleotides and encoded 360 amino acids. The predicted molecular weight of the protein was about 38.924k Da. the isoelectric point was named Cu NiR(Genbank accession number KX6743780.The domain analysis showed that the coding region of the protein contained signal peptide, a copper ion binding site and a redox enzyme catalytic domain. Cu NiR gene was constructed into p ET22b vector. The expression was induced in Escherichia coli E. colianum BL21DE3. The SDS-PAGE-based detection of 12 alkyl sodium sulfate gel electrophoresis showed that the target protein was soluble and expressed. The recombinant protein was purified by nickel affinity chromatography. The specific activity was 123.82 U / mg, which laid a theoretical foundation for the characterization of the biochemical properties of copper containing nitrite reductase (Cu NiR).
【作者單位】： 大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;遼寧省海洋微生物工程技術(shù)研究中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31500039)
【分類(lèi)號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：1525916