本文關(guān)鍵詞：用巢式和半巢式PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆Roundup Ready及其深加工食品，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《沈陽(yáng)師范大學(xué)》 2013年

熱加工處理轉(zhuǎn)Bt水稻基因的降解及其檢測(cè)研究

黃賽楠  

【摘要】：在我國(guó)自主轉(zhuǎn)Bt基因水稻快速發(fā)展的背景下，針對(duì)目前對(duì)其在加工品中的檢測(cè)還沒有系統(tǒng)研究的情況下，本研究利用外源模擬熱加工的方法，選取我國(guó)目前幾個(gè)成熟的轉(zhuǎn)Bt基因水稻作為研究對(duì)象，研究適合含有米質(zhì)品加工品的DNA提取方法，并研究轉(zhuǎn)Bt基因水稻不同加工過程內(nèi)、外源基因及Bt蛋白含量的降解規(guī)律，建立相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)，完善加工品轉(zhuǎn)基因成份的檢測(cè)規(guī)程，為轉(zhuǎn)基因成份的檢測(cè)和溯源提供技術(shù)支持，對(duì)于轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管具有重要意義。主要研究結(jié)果如下： 1.DNA提取方法研究：本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了5種不同方法提取轉(zhuǎn)Bt基因水稻（Bt-ZJ22）及含有米質(zhì)品的加工品DNA的效果。以確定適合轉(zhuǎn)基因水稻及其加工品DNA的提取方法，為后續(xù)建立轉(zhuǎn)基因水稻及其加工品的PCR檢測(cè)方法莫定基礎(chǔ)。結(jié)果顯示CTAB法和堿處理法所提取的DNA得率較高；在純度上5種方法相差不大；瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)5種方法提取的DNA完整性顯示所有樣品提取的DNA均嚴(yán)重降解；在以水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因SPS進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，Wizard kit法擴(kuò)增效果最好，能夠滿足PCR定性鑒定的需要，而且提取過程簡(jiǎn)單、快速。綜合考慮，Wizard kit法更適合于轉(zhuǎn)基因水稻及其加工品PCR檢測(cè)中DNA模板的制備。 2.熱加工處理對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因水稻內(nèi)外源基因的影響：采用高溫滅活、水煮、高溫烘干和微波4種外源模擬熱加工的方法處理3種轉(zhuǎn)Bt基因水稻（KMD1、TT51-1和KF6），按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因SPS、調(diào)控元件CaMV35S啟動(dòng)子和NOS終止子、外源基因Bt進(jìn)行定性PCR檢測(cè)，研究目前對(duì)這三種轉(zhuǎn)基因水稻的檢測(cè)方法是否適合檢測(cè)其在加工品中的成份。并針對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因水稻外源基因各個(gè)片斷（Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ab/Cry1Ac等）利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier5.0設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物，對(duì)水稻內(nèi)源SPS基因和外源Bt基因進(jìn)行不同大小片段的PCR擴(kuò)增，了解轉(zhuǎn)Bt基因水稻在模擬熱加工過程中內(nèi)、外源基因的降解規(guī)律，尋找外源基因在加工品中的穩(wěn)定區(qū)域。研究結(jié)果表明，三種Bt基因在熱處理過程中的降解情況不盡相同。熱加工過程無(wú)論對(duì)內(nèi)源基因和外源插入基因的檢測(cè)都有影響，，轉(zhuǎn)基因水稻中的各種外源成分在不同加工條件下穩(wěn)定性不同。本文新設(shè)計(jì)的引物可以成功的用于轉(zhuǎn)基因水稻及其加工產(chǎn)品的檢測(cè)。 3.熱加工處理對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因水稻蛋白含量的影響：實(shí)驗(yàn)中采用ELISA方法測(cè)定了不同熱加工處理轉(zhuǎn)Bt基因水稻種子中Bt蛋白的表達(dá)水平及蛋白含量，結(jié)果顯示微波和180℃烘干處理仍能檢測(cè)出Bt蛋白；高溫滅活處理在TT51-1和KF6中能檢測(cè)到極少量的蛋白含量，KMD1中未檢出；200℃烘干和水煮處理對(duì)Bt蛋白含量影響較大，在三種

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：TS210.7
【目錄】：

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7 張強(qiáng);李克斌;尹姣;曹雅忠;;針對(duì)蠐螬的高效BT菌株的篩選及復(fù)選[A];公共植保與綠色防控[C];2010年

8 何佳春;賴?guó)P香;胡陽(yáng);;Bt稻田與非Bt稻田中黑肩綠盲蝽動(dòng)態(tài)規(guī)律比較研究初報(bào)[A];公共植保與綠色防控[C];2010年

9 楊子山;;Bt棉花對(duì)土壤微生物的安全性評(píng)價(jià)進(jìn)展[A];中國(guó)棉花學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文匯編[C];2011年

10 謝天健;;中國(guó)Bt殺蟲劑產(chǎn)業(yè)化進(jìn)展[A];全國(guó)生物防治學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];1995年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 易運(yùn)文;[N];光明日?qǐng)?bào);2010年

2 記者 韓曉玲　實(shí)習(xí)生 華子博 通訊員 農(nóng)宣;[N];湖北日?qǐng)?bào);2010年

3 馮耀華　詹曙光;[N];糧油市場(chǎng)報(bào);2011年

4 CBN記者 馬曉芳;[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2009年

5 馮國(guó)明;[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2010年

6 記者 陳忠權(quán);[N];天津日?qǐng)?bào);2010年

7 張揚(yáng);重慶交通科研設(shè)計(jì)院 探索BT模式取得重大突破[N];中國(guó)交通報(bào);2011年

8 ;[N];中國(guó)鐵道建筑報(bào);2009年

9 實(shí)習(xí)記者 趙月;[N];畢節(jié)日?qǐng)?bào);2009年

10 記者 楊晶;[N];上海證券報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋阿琳;硅提高水稻對(duì)高鋅脅迫抗性的生理與分子機(jī)理[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

2 胡昌泉;水稻胚乳發(fā)育相關(guān)基因的篩選及功能分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

3 劉美玲;融合多元環(huán)境因子的水稻重金屬污染水平遙感評(píng)估模型[D];中國(guó)地質(zhì)大學(xué)（北京）;2011年

4 張先文;水稻高溫逆境下全基因組差異基因表達(dá)譜分析與特異啟動(dòng)子的功能鑒定[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 官華忠;水稻包穗的遺傳研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

6 許明;籽粒莧AmA1基因和人乳鐵蛋白基因轉(zhuǎn)化水稻的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

7 趙強(qiáng);基于高通量測(cè)序的水稻基因型鑒定以及水稻秈粳第四號(hào)染色體比較基因組研究[D];上海交通大學(xué);2011年

8 向殿軍;ICE1-like轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其轉(zhuǎn)化水稻的抗冷效果評(píng)價(jià)[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 孫利軍;水稻ONAC家族基因重疊表達(dá)特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D];浙江大學(xué);2012年

10 寧婧;水稻中兩個(gè)MAPKKK基因的功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃賽楠;熱加工處理轉(zhuǎn)Bt水稻基因的降解及其檢測(cè)研究[D];沈陽(yáng)師范大學(xué);2013年

2 張迎春;轉(zhuǎn)Bt基因水稻對(duì)環(huán)境微生物的影響[D];南京林業(yè)大學(xué);2010年

3 張翠霞;轉(zhuǎn)新Bt抗蟲基因水稻研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 常曉娜;高CO_2環(huán)境下轉(zhuǎn)Bt水稻的氮素代謝生理及其抗蟲性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 倪建平;我國(guó)水稻知識(shí)產(chǎn)權(quán)現(xiàn)狀與發(fā)展方向研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

6 亓娜;水稻Rf-1基因?qū)T型不育細(xì)胞質(zhì)的育性恢復(fù)研究[D];天津農(nóng)學(xué)院;2013年

7 陳裕坤;苯丙氨酸解氨酶基因遺傳轉(zhuǎn)化水稻的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

8 鄧湘雄;水稻響應(yīng)鎘脅迫的差異磷酸化蛋白質(zhì)組研究[D];杭州師范大學(xué);2012年

9 李曉明;水稻內(nèi)參蛋白質(zhì)的選擇及鑒定[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 周偉輝;水稻耐熱性生理機(jī)理和耐熱資源的鑒定與篩選[D];浙江大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：用巢式和半巢式PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆Roundup Ready及其深加工食品，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：152039