本文關(guān)鍵詞： EGFR熱點(diǎn)突變 等位基因PCR 脫氧次黃嘌呤 肺癌　出處：《中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2017年22期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立基于脫氧次黃嘌呤修飾等位基因特異熒光聚合酶鏈反應(yīng)(d I-AS-PCR)方法,檢測表皮生長因子受體(EGFR)基因熱點(diǎn)突變L858R和19del(2235~2249,2236~2250)。方法設(shè)計(jì)包含擴(kuò)增EGFR基因L858R和19del熱點(diǎn)突變在內(nèi)的特異性引物、熒光探針和內(nèi)參體系;且特異檢測基因突變的等位基因PCR引物3’-末端n-1或n-2位置采用脫氧次黃嘌呤(d I)修飾。建立標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控樣品,應(yīng)用熒光PCR檢測,并分析結(jié)果。結(jié)果 d I-AS-PCR能夠在野生型背景下檢測低于0.1%的突變,對50例肺癌臨床樣本進(jìn)行檢測,有9例(18%)EGFR基因發(fā)生L858R突變,14(28%)例19del基因突變。EGFR基因熱點(diǎn)突變率為46%,其檢測結(jié)果與DNA測序完全一致。結(jié)論基于d I-AS-PCR技術(shù)的特異熒光PCR檢測EGFR基因熱點(diǎn)突變,敏感性高,特異性強(qiáng),可以應(yīng)用于臨床EGFR基因突變檢測,指導(dǎo)個性化用藥及酪氨酸激酶抑制劑(TKI)治療耐藥監(jiān)測。
[Abstract]:Objective to establish a modified DNA hypoxanthine allele specific polymerase chain reaction (D I-AS-PCR) method, based on the detection of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene mutations L858R and 19del (2235~22492236~2250). The design method includes specific primers for amplification of EGFR gene of L858R and 19del hot point mutations, fluorescent probe and reference system and specific; detection of gene mutation allele PCR primer 3 '- end n-1 or n-2 position using hypoxanthine (D I) - modified. To establish standards and quality control samples, application of fluorescence PCR detection, and the results of the analysis. The D I-AS-PCR is able to detect less than 0.1% mutations in the wild-type background, detection of clinical samples of 50 cases lung cancer, 9 cases (18%) of EGFR gene L858R mutation, 14 (28%) cases of 19del mutation in.EGFR gene mutation rate was 46%, the detection results and DNA sequencing were identical. Conclusion based on D I-AS-PCR technology specific fluorescence PCR detection of EGFR gene hotspot mutation, high sensitivity, specificity, can be applied to clinical EGFR gene mutation detection, to guide personalized drug therapy and tyrosine kinase inhibitor (TKI) for drug resistance monitoring.

【作者單位】： 河北省胸科醫(yī)院(河北省肺癌防治研究中心);
【基金】：河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會重點(diǎn)跟蹤項(xiàng)目(No:GL2014061)
【分類號】：R735.35

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本文編號：1510784