本文關(guān)鍵詞： MO 膜蛋白 p基因 克隆 原核表達(dá) 反應(yīng)原性　出處：《西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2016年02期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：為了分析綿羊肺炎支原體(MO)膜蛋白p56的反應(yīng)原性,本研究以MO新疆流行株為模板,設(shè)計(jì)特異性引物對(duì)p56抗原集中區(qū)段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序,進(jìn)一步亞克隆至表達(dá)載體pET-28a(+)中,構(gòu)建pET-28a(+)-p56原核表達(dá)載體。將重組載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,用IPTG對(duì)重組菌進(jìn)行誘導(dǎo),SDS-PAGE和Western blot分析表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果表明,SDS-PAGE分析證實(shí)表達(dá)的重組融合蛋白相對(duì)分子量為44 kDa;Western blot分析表明該重組蛋白可與MO陽(yáng)性血清發(fā)生特異性免疫學(xué)反應(yīng),證實(shí)表達(dá)的重組p56融合蛋白具有良好的反應(yīng)原性,為進(jìn)一步研發(fā)MO檢測(cè)用抗原奠定了前期基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to analyze the reactivity of the membrane protein p56 of Mycoplasma pneumoniae, a specific primer was designed to amplify the concentrated region of p56 antigen using MO Xinjiang epidemic strain as template, and the amplified product was cloned and sequenced. The recombinant vector was subcloned into the expression vector pET-28a (pET-28a ()), and the expression vector pET-28a (pET-28a) (pET-28a) was constructed. The recombinant vector was transformed into E. coli BL21DDE3 cells. IPTG was used to induce SDS-PAGE and Western blot analysis of the expressed product. The results showed that the relative molecular weight of the expressed recombinant fusion protein was 44 kDa blot, which indicated that the recombinant protein could react specifically with MO positive serum. It was confirmed that the recombinant p56 fusion protein had good reactivity, which laid a foundation for the further development of antigen for MO detection.
【作者單位】： 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家國(guó)際科技合作專項(xiàng)(2014DFR31310) 兵團(tuán)國(guó)際科技合作計(jì)劃(2012BC006)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.62

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本文編號(hào)：1501789