發(fā)布時間：2018-01-30 00:26

  本文關鍵詞： 乳腺腫瘤 瘦素 果糖-二磷酸酶 細胞增殖 細胞凋亡　出處：《腫瘤》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討瘦素(leptin)對人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231細胞增殖和凋亡的影響,及其可能的分子作用機制。方法:應用瘦素(200 ng/mL)處理人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231細胞后,分別采用CCK-8法和FCM法檢測BT-474和MDA-MB-231細胞的增殖及凋亡能力;蛋白質印跡法檢測增殖相關蛋白c-Myc和cyclin D1以及凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax表達的變化。采用實時熒光定量PCR和蛋白質印跡法分別檢測經瘦素(200 ng/mL)處理后,BT-474和MDAMB-231細胞內果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)mRNA和蛋白表達水平的變化。然后,采用脂質體轉染法,將攜帶有FBP 1基因的重組質粒分別轉染至BT-474和MDA-MB-231細胞中,隨后行瘦素(200 ng/mL)處理,再應用實時熒光定量PCR和蛋白質印跡法檢測FBP1 mRNA及其蛋白的表達水平,以驗證FBP 1基因過表達的效果。采用CCK-8法再次檢測BT-474和MDA-MB-231細胞的增殖能力的變化,蛋白質印跡法檢測增殖相關蛋白c-Myc和cyclin D1表達水平的變化,FCM法檢測細胞凋亡率的變化,并采用蛋白質印跡法檢測凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax表達水平的變化。結果:經瘦素(200 ng/mL)處理后,BT-474和MDA-MB-231細胞的增殖能力明顯增強(P值均0.01);增殖相關蛋白c-Myc和cyclin D1的表達水平明顯升高(P值均0.01);同時,細胞凋亡率明顯減少(P值均0.01);凋亡相關蛋白Bcl-2表達水平明顯升高(P值均0.01),Bax表達水平明顯降低(P值均0.01)。2株細胞中FBP1 mRNA及蛋白的表達水平均較未用瘦素處理前明顯下調(P值均0.05)。FBP1過表達的BT-474和MDA-MB-231細胞經瘦素處理后,FBP1 mRNA及蛋白的表達水平均明顯上調(P值均0.01),并抑制BT-474和MDA-MB-231細胞的增殖能力,促進細胞的抗凋亡能力(P值均0.01)。結論:瘦素可促進人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231細胞的增殖并抑制2株細胞的凋亡,其機制可能與下調FBP 1基因表達有關。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of leptin on proliferation and apoptosis of human breast cancer BT-474 and MDA-MB-231 cells. Methods: human breast cancer BT-474 and MDA-MB-231 cells were treated with leptin 200 ng / mL. The proliferation and apoptosis of BT-474 and MDA-MB-231 cells were detected by CCK-8 assay and FCM assay respectively. Detection of proliferation-associated proteins c-Myc and cyclin by Western blotting. The expression of D1 and apoptosis-related protein Bcl-2 and Bax were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting respectively. 200 ng / mL). Fructose-1 fructose-1 bisphosphatase 1 in BT-474 and MDAMB-231 cells. The expression level of FBP1)mRNA and protein was changed. Then, the liposome transfection method was used. The recombinant plasmid carrying FBP 1 gene was transfected into BT-474 and MDA-MB-231 cells, and then treated with leptin 200 ng / mL. The expression of FBP1 mRNA and its protein was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. In order to verify the effect of overexpression of FBP 1 gene, the proliferative ability of BT-474 and MDA-MB-231 cells was detected again by CCK-8 assay. The expression of proliferation-associated protein c-Myc and cyclin D1 was detected by Western blotting and apoptosis rate was detected by FCM. The expression levels of Bcl-2 and Bax of apoptosis-related proteins were detected by Western blotting. Results: after treated with leptin 200 ng / mL. The proliferative ability of BT-474 and MDA-MB-231 cells increased significantly (P < 0.01). The expression of proliferation-associated protein c-Myc and cyclin D1 increased significantly (P < 0.01). At the same time, the percentage of apoptosis decreased significantly (P < 0.01). The expression of apoptosis-related protein Bcl-2 increased significantly (P < 0.01). The expression of FBP1 mRNA and protein were significantly decreased by Bax expression in both 0. 01 and 0. 2 cells compared with those before leptin treatment (P < 0. 05). The BT-474 and MDA-MB-231 cells overexpressed by FBP1 were treated with leptin. The expression of FBP1 mRNA and protein increased significantly (P < 0.01), and inhibited the proliferation of BT-474 and MDA-MB-231 cells. Conclusion: leptin can promote the proliferation of human breast cancer BT-474 and MDA-MB-231 cells and inhibit the apoptosis of two cell lines. The mechanism may be related to the down-regulation of FBP 1 gene expression.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學院臨床檢驗診斷學教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:81272544)~~
【分類號】：R737.9
【正文快照】： 乳腺癌是中國女性發(fā)病率最高的癌癥,也是中國女性惡性腫瘤的第6位死亡原因[1]。瘦素(leptin)是一類由肥胖基因編碼、由脂肪細胞合成分泌的多肽類激素。瘦素除了能調節(jié)機體能量平衡、維持正常生殖周期和介導免疫應答之外,還可特異性地與其受體結合,通過激活下游的信號轉導蛋白,

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本文編號：1474772