本文關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)基因煙草 多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR 外源基因 拷貝數(shù)　出處：《中國(guó)煙草學(xué)報(bào)》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】采用多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法在一個(gè)反應(yīng)內(nèi)同時(shí)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因煙草中插入外源基因35S、NOS、NPT II的拷貝數(shù)�！痉椒ā繉⑥D(zhuǎn)基因陽(yáng)性參照煙草基因組DNA經(jīng)梯度稀釋,通過(guò)多重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)同時(shí)獲得煙草內(nèi)源參照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT II的相關(guān)性標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,將待測(cè)株系外源基因的Ct值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程后估算其拷貝數(shù)�！窘Y(jié)果】獲得了上述4個(gè)基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其R2均接近于1,相關(guān)性較高。在檢測(cè)的六個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中初篩到3株3個(gè)外源基因均為單拷貝的株系�！窘Y(jié)論】可使用該方法對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草外源基因插入拷貝數(shù)進(jìn)行估算,為獲得穩(wěn)定遺傳材料提供初篩依據(jù)。
[Abstract]:[objective] to detect the exogenous gene 35SNs in transgenic tobacco simultaneously by multiplex real-time fluorescent quantitative PCR (PCR) in a single reaction. Copy number of NPT II. [methods] the genomic DNA of transgenic reference tobacco was diluted by gradient, and the endogenous reference gene NR was obtained simultaneously by multiplex fluorescence quantitative PCR reaction. The standard curve equation of the correlation of the exogenous gene 35SnSN NPT II. The Ct value of the foreign gene was substituted into the standard curve equation and the copy number was estimated. [results] the standard curves of the four genes were obtained, and the R2 of the four genes was close to 1. Among the six transgenic lines tested, three of them were single copy lines. [conclusion] this method can be used to estimate the number of inserted copies of exogenous genes in transgenic tobacco. In order to obtain stable genetic materials to provide a preliminary screening basis.
【作者單位】： 貴州省煙草科學(xué)研究院煙草行業(yè)煙草分子遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：中國(guó)煙草總公司貴州省公司科技項(xiàng)目(201604) 貴州省科技支撐計(jì)劃農(nóng)業(yè)攻關(guān)科技計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合NY[2013]3020號(hào)) 貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字[2014]2117號(hào))
【分類號(hào)】：S572
【正文快照】： 1983年,第一株轉(zhuǎn)基因煙草問(wèn)世[1],煙草作為植物分子生物學(xué)研究的模式植物,30多年來(lái),人們對(duì)煙草的轉(zhuǎn)基因研究從未停歇,包括將煙草自身基因進(jìn)行超量表達(dá)以驗(yàn)證其基因功能[2-4],外源基因在煙草中表達(dá)后的功能驗(yàn)證[5-7]等,這些研究均需使用轉(zhuǎn)基因技術(shù)。然而,無(wú)論是內(nèi)源基因的過(guò)表

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本文編號(hào)：1468917