發(fā)布時(shí)間：2018-01-25 03:58

  本文關(guān)鍵詞： 糖苷轉(zhuǎn)移酶 過(guò)表達(dá) 氨基糖苷類抗生素 慶大霉素B 慶大霉素C1a　出處：《沈陽(yáng)藥科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展,對(duì)氨基糖苷類抗生素有了更加深入的了解。經(jīng)生物合成手段改造的一些生物活性強(qiáng),低毒性的半合成類氨基糖苷類抗生素成為近年來(lái)研究的焦點(diǎn)。慶大霉素B作為2-DOS類氨基糖苷類抗生素,是異帕米星合成的原料藥,獲得慶大霉素B高產(chǎn)菌株對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)有著重要意義。慶大霉素的生物合成途徑已經(jīng)被闡明,GenK和GenP分別為甲基化酶和磷酸轉(zhuǎn)移酶,本研究中對(duì)基因genK和genP同時(shí)進(jìn)行阻斷,成功得到了 JI-20A高產(chǎn)菌,JI-20A經(jīng)氧化脫氨再還原后可形成慶大霉素B。以JI-20A高產(chǎn)菌為出發(fā)菌株,將來(lái)自卡那霉素產(chǎn)生菌卡那鏈霉菌的kanJ和kanK進(jìn)行異源表達(dá),搭配3種不同種類的啟動(dòng)子進(jìn)行篩選,最終獲得了慶大霉素B高產(chǎn)菌。研究還通過(guò)代謝工程手段,將糖苷轉(zhuǎn)移酶KanM1和GenM2進(jìn)行過(guò)表達(dá),結(jié)合葡萄糖流加的方法將慶大霉素B的產(chǎn)量進(jìn)一步提高。本實(shí)驗(yàn)室之前將genK阻斷構(gòu)建了慶大霉素C1a高產(chǎn)菌株。以此為出發(fā)菌株,將糖苷轉(zhuǎn)移酶KanM1和GenM2進(jìn)行過(guò)表達(dá)與流加葡萄糖的方法使慶大霉素C1a產(chǎn)量在原有基礎(chǔ)上有所提高。糖苷轉(zhuǎn)移酶KanM1和GenM2在Mechinospora中過(guò)表達(dá)系統(tǒng)的建立實(shí)現(xiàn)了初級(jí)代謝物向次級(jí)代謝物轉(zhuǎn)化,為在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)改變代謝流提供了現(xiàn)實(shí)依據(jù),也為通過(guò)調(diào)節(jié)酶控制初級(jí)代謝產(chǎn)物向目標(biāo)次級(jí)代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)化提供了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:With the continuous development of genetic engineering technology, the aminoglycoside antibiotics have a deeper understanding. Some of the biological activities modified by biosynthesis are strong. Low-toxicity semi-synthetic aminoglycoside antibiotics have become the focus of research in recent years. As 2-DOS aminoglycoside antibiotics gentamicin B is the raw material of isopamicin synthesis. The biosynthesis pathway of gentamicin B has been elucidated that genk and GenP are methylase and phosphotransferase respectively. In this study, the gene genK and genP were blocked at the same time, and JI-20A producing bacteria were successfully obtained. Gentamicin B could be formed by oxidative deamination and rereduction of JI-20A. The JI-20A producing strain was used as the starting strain. The kanJ and kanK from Streptomyces kanamycin producing strain were heterologous and screened with three different promoters. Finally, Gentamicin B high yield strain was obtained. KanM1 and GenM2 were also overexpressed by metabolic engineering. The yield of gentamicin B was further increased by the method of glucose infusion. The high yield strain of gentamicin C 1a was constructed by blocking genK in our laboratory. Gentamicin C1a production was increased by overexpressing KanM1 and GenM2 and adding glucose to Gentamicin C1a. KanM1 and GenM2 in M. The establishment of overexpression system in echinospora realized the transformation of primary metabolites to secondary metabolites. It provides a practical basis for regulating metabolic flow in cells, and also provides a theoretical basis for controlling the conversion of primary metabolites to target secondary metabolites by regulating enzymes.
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TQ927

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本文編號(hào)：1461916