本文關(guān)鍵詞： 小菜蛾 C型凝集素 基因克隆 微生物誘導(dǎo) 免疫應(yīng)答　出處：《昆蟲學(xué)報》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】本研究旨在克隆小菜蛾P(guān)lutella xylostella體內(nèi)一種C型凝集素基因,檢測其在小菜蛾體內(nèi)的表達模式,并探討該蛋白對細菌的凝集作用�！痉椒ā炕趯π〔硕贽D(zhuǎn)錄組和基因組進行生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù)克隆小菜蛾C型凝集素基因全長cDNA序列。構(gòu)建原核表達質(zhì)粒載體,在大腸桿菌BL21中高效表達小菜蛾C型凝集素融合蛋白,利用純化的融合蛋白免疫新西蘭大白兔,獲得了高效價的抗血清。利用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測小菜蛾C型凝集素基因在小菜蛾不同發(fā)育時期(卵期、1-4齡幼蟲、預(yù)蛹期、蛹期和成蟲期)和小菜蛾4齡第1天幼蟲不同組織(血細胞、表皮、脂肪體、中腸和馬氏管)中的表達模式。RT-qPCR和Western blot檢測小菜蛾C型凝集素基因在大腸桿菌和蘇云金芽孢桿菌刺激下的表達差異。顯微鏡下觀察重組蛋白對這兩種細菌的體外凝集現(xiàn)象�！窘Y(jié)果】克隆了小菜蛾型C型凝集素基因PxCTL5(GenBank登錄號:KY807084),cDNA序列全長1 243 bp,開放閱讀框(ORF)序列長672bp,編碼223個氨基酸殘基。RT-qPCR顯示PxCTL5基因在小菜蛾各個齡期均有表達,在成蟲期處于高水平表達;主要在表皮中表達,可被蘇云金芽孢桿菌和大腸桿菌強烈誘導(dǎo)表達,表達高峰期分別為誘導(dǎo)后18 h和24 h。Western blot檢測表明,經(jīng)蘇云金芽孢桿菌和大腸桿菌誘導(dǎo)后,小菜蛾血淋巴中PxCTL5蛋白表達量明顯提高。體外凝集實驗表明,在鈣離子存在下,PxCTL5蛋白對兩種細菌都有一定的凝集作用,對蘇云金芽孢桿菌的凝集作用較強�！窘Y(jié)論】小菜蛾P(guān)xCTL5可經(jīng)細菌誘導(dǎo)表達,PxCTL5對蘇云金芽孢桿菌有較強凝集作用。
[Abstract]:[objective] to clone a C-type lectin gene of Plutella xylostella Plutella xylostella and to detect its expression pattern in Plutella xylostella. The agglutination of the protein to bacteria was studied. [methods] based on the bioinformatics analysis of the transcriptome and genome of Plutella xylostella. The full-length cDNA sequence of C-type lectin gene of Plutella xylostella was cloned by RT-PCR and RACE, and the prokaryotic expression plasmid vector was constructed. C-type lectin fusion protein of Plutella xylostella was highly expressed in Escherichia coli BL21. The purified fusion protein was used to immunize New Zealand white rabbits. A high titer antiserum was obtained. The C-type lectin gene of diamondback moth (Plutella xylostella) was detected at different developmental stages (egg stage 1-4 instar larva, prepupa stage) by real-time fluorescence quantitative PCR. Pupa stage and adult stage) and diamondback moth larvae on day 1 of 4th instar different tissues (blood cells, epidermis, fat body). Midgut and Markov tube. RT-qPCR and Western. Blot was used to detect the difference of C type lectin gene expression between Escherichia coli and Bacillus thuringiensis. The in vitro agglutination of recombinant protein to these two bacteria was observed under microscope. Plutella xylostella type C lectin gene PxCTL5 (. GenBank login: KY807084. The length of cDNA was 1 243 BP and the length of ORF was 672 BP. The encoding of 223 amino acid residues. RT-qPCR showed that PxCTL5 gene was expressed in all stages of Plutella xylostella and high level in adult. It was mainly expressed in epidermis and could be strongly induced by Bacillus thuringiensis and Escherichia coli. The peak of expression was 18 h and 24 h after induction, respectively. After induction by Bacillus thuringiensis and Escherichia coli, the expression of PxCTL5 protein in haemolymph of Plutella xylostella increased significantly. PxCTL5 protein has a certain agglutination effect on both bacteria, and a strong agglutination effect on Bacillus thuringiensis. [conclusion] PxCTL5 can be expressed by bacteria. PxCTL5 has a strong agglutination effect on Bacillus thuringiensis.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院廣東省生物農(nóng)藥創(chuàng)制與應(yīng)用重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31071734,31371989) 廣東省科技計劃項目(2014A020208106,2015A020209128) 廣州市科技計劃項目(201509010023)
【分類號】：S433.4
【正文快照】： 脊椎動物依賴高效的獲得性免疫系統(tǒng)適應(yīng)復(fù)雜多變的生活環(huán)境,而昆蟲主要依靠體液免疫和細胞免疫構(gòu)成的先天性免疫抵抗生存環(huán)境中病原微生物的入侵(Vilmos and Kurucz,1998)。體液免疫主要包括經(jīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑產(chǎn)生合成抗菌效應(yīng)因子和酚氧化酶原系統(tǒng)的激活(Hultmark,2003;Fauvarqu

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本文編號：1460403