本文關(guān)鍵詞：擬南芥MAP激酶基因克隆及相互作用研究　出處：《蘭州大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： BiFC MAPKKKs MAPKKs MAPKs 酵母雙雜交 亞細胞定位

【摘要】：MAP激酶是植物細胞中多種信號通路的中心。在植物體中,MAP激酶不發(fā)生磷酸化,則處于靜止狀態(tài)。但當植物在射線、病原體、干旱等外界信號的刺激作用下,MAPKKK、MAPKK和MAPK順序磷酸化,激活下游靶標基因的表達,進而調(diào)控植物的生長和發(fā)育,以及植物對環(huán)境的應激適應、抗病反應等。本研究通過Gateway體外重組技術(shù),克隆了27個MAPKKKs,10個MAPKKs和13個MAPKs基因。通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)有21對MAPKKs和MAPKKKs之間存在相互作用。其中,MKK5和Raf23、Raf25、Raf47有很強的相互作用,和Raf27有較強相互作用,和MAPKKK9的相互作用較弱。同時,MKK7和Raf48有較強的相互作用,和Raf22、Raf41有較弱的作用。MKK8和Raf23、Raf25、Raf47有很強的相互作用,但和Raf27的相互作用較弱。Raf28和下游的MKK1/2/3/4/6/9/10都有相互作用,和MKK9/10的相互作用比較強,MAPKKK12和下游的MAPKKs蛋白沒有相互作用。為了進一步確定結(jié)果的可靠性,本研究還采用BiFC技術(shù)對4對基因進行驗證,結(jié)果顯示Raf23、Raf47和MKK5有相互作用,而Raf22、Raf48和MKK5沒有相互作用,和酵母雙雜交的結(jié)果一致。為進一步闡釋這些具有相互作用蛋白的功能,本研究還對以上MAP激酶分別進行了亞細胞定位分析。結(jié)果顯示,這些蛋白主要定位在細胞質(zhì)和細胞膜上,還有一些在細胞核中也有定位,如Raf25、Raf28、MKK3、MKK5和MKK6。它們的共定位為其相互作用提供了基礎。綜上所述,本研究系統(tǒng)闡釋了MAPK信號途徑中MAPKKs和上游MAPKKKs的相互作用關(guān)系,同時還對這些蛋白進行了系統(tǒng)的亞細胞定位研究,為后續(xù)進一步開展MAPK信號通路的研究奠定了一定的基礎。
[Abstract]:MAP kinase is the center of many signaling pathways in plant cells. In plants, map kinases do not phosphorylate, but remain stationary. But when plants are in radiation, pathogens. Under the stimulation of drought and other external signals, MAPKKKK MAPKK and MAPK were sequentially phosphorylated, which activated the expression of downstream target genes and regulated the growth and development of plants. In this study, 27 MAPKKKs were cloned by Gateway recombination in vitro. Ten MAPKKs and 13 MAPKs genes. 21 pairs of MAPKKs and MAPKKKs were found to interact with each other by yeast two-hybrid. MKK5 has strong interaction with Raf25 Raf47, strong interaction with Raf27 and weak interaction with MAPKKK9. MKK7 and Raf48 have strong interaction with Raf22 Raf41. MKK8 and Raf23 Raf25 Raf47 have strong interaction. However, the interaction with Raf27 is weak. Raf28 and downstream MKK1/2/3/4/6/9/10 have strong interaction with MKK9/10. There was no interaction between MAPKKK12 and downstream MAPKKs protein. In order to further determine the reliability of the results, BiFC technique was also used to verify the four pairs of genes. The results showed that Raf23, Raf47 and MKK5 interact with each other, while Raf22, Raf48 and MKK5 have no interaction. In order to further elucidate the function of these interacting proteins, the subcellular localization analysis of the above MAP kinase was also carried out. These proteins are mainly located in the cytoplasm and cell membrane, and some also in the nucleus, such as Raf25, Raf28MKK3. MKK5 and MKK6. their co-localization provides the basis for their interaction. In this study, the interaction between MAPKKs and upstream MAPKKKs in MAPK signaling pathway was systematically explained, and the subcellular localization of these proteins was also studied. It lays a foundation for further research on MAPK signaling pathway.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2

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本文編號：1441467