本文關鍵詞：產(chǎn)番茄紅素Yarrowia lipolytica基因工程菌的構建　出處：《中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 番茄紅素 耶氏解脂酵母 基因工程 發(fā)酵

【摘要】：番茄紅素是一種天然類胡蘿卜素,具有多種生理功能,在食品、藥品等領域有著重要的應用價值,利用合成生物學技術構建基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)番茄紅素是目前的一個研究熱點。耶氏解脂酵母由于其卓越的脂質合成和積累能力,在脂類物質生產(chǎn)方面具有很好的應用潛力。本文的研究目的是構建生產(chǎn)番茄紅素的耶氏解脂酵母工程菌。首先,構建含有番茄紅素合成途徑關鍵基因crtB(編碼八氫番茄紅素合成酶,催化兩分子r{牛兒基r{牛兒基焦磷酸縮合生成八氫番茄紅素)、crtI(編碼八氫番茄紅素去飽和酶,催化八氫番茄紅素脫氫生成番茄紅素)、GGS1(編碼r{牛兒基r{牛兒基焦磷酸合成酶,催化法尼基焦磷酸和異戊二烯焦磷酸縮合生成r{牛兒基r{牛兒基焦磷酸)的質粒pBIGgut2、pBIGInt F,這兩個質粒能夠把外源基因整合于耶氏解脂酵母染色體GUT2(位于B染色體,編碼甘油三磷酸脫氫酶,催化甘油醛-3-磷酸轉化為二羥基丙酮磷酸)和IntF(位于F染色體,目前尚未發(fā)現(xiàn)有任何基因功能)位點。然后,通過LiAc轉化方法將線性化質粒pBIGgut2導入耶氏解脂酵母20362(Hmg)感受態(tài)細胞,利用MM(基本培養(yǎng)基)平板篩選重組子,得到9個陽性轉化子,進行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng),其中LY3001-1在搖瓶中番茄紅素發(fā)酵產(chǎn)量最高,為49mg/L。最后,初步研究了LY3001-1菌種在5L發(fā)酵罐上發(fā)酵的代謝規(guī)律。通過補料培養(yǎng),番茄紅素發(fā)酵48h的產(chǎn)量達到492.5mg/L。
[Abstract]:Lycopene is a kind of natural carotenoid, has many physiological functions, and has important application value in food, medicine and other fields. The production of lycopene by using synthetic biological technology of genetically engineered bacteria is a research hotspot at present. Yeasts have excellent ability of lipid synthesis and accumulation due to their excellent lipid synthesis and accumulation ability. It has good application potential in the production of lipids. The purpose of this study is to construct yeast-lycopene lycopene yeast engineering bacteria. First of all. The key gene of lycopene synthesis pathway crtB (encoding octahydrolycopene synthase, which catalyzes the condensation of two molecules r {bovine base r {bovine base pyrophosphoric acid) to produce octahydrolycopene was constructed. CrtI (encoding lycopene desaturase) catalyzes the dehydrogenation of lycopene to lycopene GGS1. The plasmid pBIGgut2pBIGInt F was synthesized by catalytic condensation of pyrophosphoric acid with isoprene pyrophosphoric acid. These two plasmids can integrate foreign genes into GUT2 (located on chromosome B, encoding glycerol triphosphate dehydrogenase). Catalytic conversion of glyceraldehyde-3-phosphoric acid to dihydroxy acetone phosphoric acid) and IntF (located on the F chromosome, no gene function has been found so far). Then. The linearized plasmid pBIGgut2 was introduced into the receptive cells of Lipiomyces yeast-20362Hmg by LiAc transformation, and the recombinant was screened by using MM2 (basic medium) plate. Nine positive transformants were obtained and cultured in shake flask. The yield of lycopene was the highest in shaking flask, which was 49mg / L. The metabolic law of LY3001-1 strain fermenting on 5L fermenter was studied preliminarily. The yield of lycopene reached 492.5 mg / L after 48h fermentation.
【學位授予單位】：中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q78;Q939.9

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4 王s，

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