本文關(guān)鍵詞：果樹(shù)轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展與產(chǎn)業(yè)化展望，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2009年

豆梨遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及轉(zhuǎn)基因植株增殖生根研究

劉松瑜  

【摘要】： 豆梨是南方梨樹(shù)常用砧木,耐瘠薄,對(duì)土壤的適應(yīng)性強(qiáng),抗旱,耐澇,抗腐爛病,跟西洋梨和中國(guó)梨的親和性都很好,但不耐寒,苗期根系稀少,生長(zhǎng)較弱。rolB基因是從Agrobacteciumrhizogenes菌的Ri質(zhì)粒的T-DNA上分離出來(lái)的,rolB基因能夠使植株矮化和明顯的改善生根。將rolB基因轉(zhuǎn)入砧木植株中,可使砧木矮化,增強(qiáng)生根能力。 本研究以南方梨砧木豆梨的子葉作為轉(zhuǎn)基因的受體材料,以rolB基因?yàn)橥庠椿?研究了不同預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、工程菌液濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間以及篩選方法對(duì)其遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響及適合轉(zhuǎn)基因豆梨的增殖與生根培養(yǎng)基。以MS+NAA0.2mg/L+6-BA4mg/L為分化培養(yǎng)基,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了豆梨的遺傳轉(zhuǎn)化研究,通過(guò)豆梨子葉的敏感性試驗(yàn),最終確定子葉誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽時(shí)Kan的臨界濃度為50mg/L,芽誘導(dǎo)生根時(shí)Kan的臨界濃度為25mg/L,抑菌抗生素Cef和Carb保持在250mg/L時(shí)既能起到抑菌作用,又能保證有一定再生率。成功摸索出農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豆梨遺傳轉(zhuǎn)化體系：將豆梨子葉預(yù)培養(yǎng)4d,菌液濃度OD_(600)=0.4,添加100μM/L的AS,侵染10min,共培養(yǎng)3d,預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)都在暗處25℃進(jìn)行,共培養(yǎng)后依次加入25mg/LKan到50mg/LKan的量篩選或共培養(yǎng)后晚6d再加入50mg/LKan的量進(jìn)行篩選。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將外源rolB基因?qū)氲蕉估嬷?為豆梨的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性育種提供理論基礎(chǔ)。 其中一部分抗性苗在添加Kan的篩選培養(yǎng)基上的再生,并通過(guò)PCR分子檢測(cè),有4株出現(xiàn)了特異性擴(kuò)增條帶,而陰性對(duì)照沒(méi)有特異性條帶產(chǎn)生,說(shuō)明外源基因已經(jīng)初步整合到豆梨基因組中。豆梨子葉的遺傳轉(zhuǎn)化中最高不定芽分化率達(dá)到15%。 通過(guò)對(duì)豆梨轉(zhuǎn)化苗的增殖試驗(yàn),表明轉(zhuǎn)化苗繼代增殖時(shí)以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+Kan25mg/L+Carb 180mg/L+Cef180mg/L為培養(yǎng)基。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化苗豆梨的生根試驗(yàn),表明轉(zhuǎn)化植株在生根能力上明顯強(qiáng)于對(duì)照,在以1/4MS+IBA3.0mg/L為生根培養(yǎng)基時(shí),生根率為80%,而對(duì)照只有60%,轉(zhuǎn)化植株表現(xiàn)為須根增多。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：S661.2
【目錄】：

摘要8-9

Abstract9-11

第一章 前言11-22

1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的梨轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展11-17

1.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的研究進(jìn)展11-15

1.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法在果樹(shù)中的應(yīng)用15-16

1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法在梨中的應(yīng)用16-17

1.4 梨轉(zhuǎn)化中存在的問(wèn)題17

2 rol基因性狀研究17-18

2.1 rolB基因?qū)ι绊懷芯?/span>17-18

2.2 rol基因矮化性狀研究18

3 國(guó)內(nèi)外梨矮化砧木的研究現(xiàn)狀18-19

4 本試驗(yàn)的目的19-21

5 主要技術(shù)路線21-22

第二章 豆梨農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立22-41

1 材料與方法22-26

1.1 根癌農(nóng)桿菌菌株及質(zhì)粒22

1.2 植物材料22

1.3 遺傳轉(zhuǎn)化基本培養(yǎng)基22-23

1.4 植物生長(zhǎng)物質(zhì)23

1.5 細(xì)菌培養(yǎng)基23

1.6 抗生素23-24

1.7 試驗(yàn)方法24-26

2 結(jié)果與分析26-37

2.1 子葉對(duì)Kan的敏感性分析26-27

2.2 子葉對(duì)Cef和Carb的敏感性分析27-28

2.3 Kan對(duì)植株生根的影響28-29

2.4 Cef和Carb對(duì)植株生根的影響29-30

2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的rolB基因轉(zhuǎn)化30-36

2.5.1 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化的影響30-31

2.5.2 As的濃度對(duì)轉(zhuǎn)化的影響31-32

2.5.3 菌液的濃度對(duì)轉(zhuǎn)化的影響32-33

2.5.4 侵染時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化的影響33-34

2.5.5 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)子葉分化和轉(zhuǎn)化的影響34

2.5.6 篩選方式對(duì)轉(zhuǎn)化的影響34-36

2.6 抗性植株的獲得36

2.7 抗性植株的葉片再生36-37

3 討論與小結(jié)37-41

3.1 討論37-40

3.1.1 影響豆梨農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的因素37-40

3.1.2 豆梨轉(zhuǎn)化植株的篩選40

3.2 小結(jié)40-41

第三章 轉(zhuǎn)rolB基因豆梨分子檢測(cè)及芽增殖生根研究41-48

1 材料與方法41-44

1.1 材料41

1.2 試驗(yàn)方法41-44

1.2.1 基因組DNA提取方法41

1.2.2 基因組DNA提取步驟41-42

1.2.3 PCR分子檢測(cè)42-43

1.2.4 增殖生根培養(yǎng)基43

1.2.5 增殖生根培養(yǎng)方法43-44

2 結(jié)果與分析44-46

2.1 PCR的檢測(cè)結(jié)果44

2.2 芽的增殖44-45

2.2.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)芽增殖的影響44-45

2.2.2 轉(zhuǎn)基因與對(duì)照芽增殖的差別45

2.3 生根培養(yǎng)45-46

2.3.1 不同培養(yǎng)基配方對(duì)豆梨生根的影響45-46

2.3.2 轉(zhuǎn)基因豆梨與對(duì)照生根差異46

3 討論與小結(jié)46-48

3.1 討論46-47

3.2 小結(jié)47-48

全文總結(jié)及下步工作設(shè)想48-50

縮略詞表50-51

圖版及說(shuō)明51-54

參考文獻(xiàn)54-59

致謝59-60

個(gè)人簡(jiǎn)歷60

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6 徐明義,姚芳玲,劉振中,史聯(lián)讓,張秀琴;梨屬矮化砧木研究[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1997年01期

7 李萍;艾秀蓮;危曉薇;孟慶玉;王博;王志方;黃樂(lè)平;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)雪蓮PBP基因?qū)γ藁ǖ倪z傳轉(zhuǎn)化研究[J];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年04期

8 張彬;趙明;高志強(qiáng);丁在松;石云鷺;方立鋒;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)春小麥遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化研究[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2007年02期

9 丁建剛;胡定慧;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的萵筍遺傳轉(zhuǎn)化體系初步研究[J];廣西農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年02期

10 肖艷華;曾幼玲;蘭海燕;張富春;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的天綠香遺傳轉(zhuǎn)化影響因素的研究[J];植物研究;2008年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李慧;叢郁;常有宏;盛寶龍;藺經(jīng);;豆梨葉片對(duì)鎘脅迫的生理響應(yīng)[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2010年

2 鄭小艷;蔡丹英;滕元文;鮑露;張東;;基于mDNA的ITS序列的東亞梨屬植物系統(tǒng)關(guān)系研究[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)第十屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

3 齊一伯;徐夙;韓玉珍;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的藍(lán)豬耳遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[A];中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

4 劉芳;張俊紅;王濤濤;李漢霞;葉志彪;;茄子高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 徐春波;王勇;趙海霞;李興酉;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的紫花苜蓿高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究[A];中國(guó)草學(xué)會(huì)青年工作委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集(上冊(cè))[C];2010年

6 劉炤;劉國(guó)鋒;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子CBF3轉(zhuǎn)化紅掌的研究[A];上海市植物生理學(xué)會(huì)成立三十周年慶祝活動(dòng)暨第三屆上海市植物生理學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

7 閆碩;宋玉;王廣東;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的觀賞向日葵高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[A];慶祝中國(guó)園藝學(xué)會(huì)創(chuàng)建80周年暨第11次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)論文摘要集[C];2009年

8 王萍;鄒艷;徐軍田;李信書(shū);周向紅;易樂(lè)飛;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)條斑紫菜遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究[A];慶祝中國(guó)藻類(lèi)學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

9 王戈亮;許亦農(nóng);;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆下胚軸遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立和利用RNAi改良大豆油脂品質(zhì)[A];全國(guó)植物分子育種研討會(huì)摘要集[C];2009年

10 樂(lè)超銀;郭政宏;王健;廖甜甜;劉海軍;李金鞠;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)魔芋鱗片遺傳轉(zhuǎn)化的研究[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國(guó)植物生物學(xué)研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

2 ;[N];吉林農(nóng)村報(bào);2007年

3 蘭福森 蘭璽彬;[N];福建科技報(bào);2002年

4 李太宇;[N];河南科技報(bào);2006年

5 解悅;[N];中國(guó)花卉報(bào);2007年

6 記者 鄧步來(lái) 實(shí)習(xí)生 葉曉音 通訊員 秦小紅;[N];重慶日?qǐng)?bào);2002年

7 宋黔云;[N];貴州日?qǐng)?bào);2004年

8 金晶 肖云;[N];江蘇經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

9 周錚;[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2003年

10 記者 宦建新 通訊員 李幼飛;[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉晶;中國(guó)豆梨與川梨的遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu)研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 潘剛;高效甘藍(lán)型油菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及細(xì)胞周期基因的花粉特異表達(dá)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 朱海生;草莓乙烯受體反義基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2008年

4 陳天子;基于組織培養(yǎng)和授粉后浸蘸花柱的兩種棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 曾黎輝;農(nóng)桿菌介導(dǎo)荔枝（Litchi chinensis Sonn.）遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及導(dǎo)入LEAFY基因研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2002年

6 吳關(guān)庭;農(nóng)桿菌介導(dǎo)高羊茅遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及CBF耐逆相關(guān)基因的導(dǎo)入[D];浙江大學(xué);2004年

7 畢瑞明;農(nóng)桿菌介導(dǎo)小麥成熟胚遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因小麥分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 賈笑英;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育馬鈴薯（Solanum tuberosum L.）高淀粉及抗病新品系[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 趙宇瑋;atnhx1和hvbadh1基因的克隆及對(duì)三種植物的轉(zhuǎn)化研究[D];西北大學(xué);2007年

10 賈海燕;小麥組織培養(yǎng)特性的分子遺傳分析及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王宏偉;豆梨組織培養(yǎng)過(guò)程中玻璃化形成機(jī)制及其恢復(fù)技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 陶愛(ài)群;豆梨離體再生體系建立與rol B基因轉(zhuǎn)化研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 張霞;中華補(bǔ)血草遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及補(bǔ)血草NKCC基因沉默的功能研究[D];山東師范大學(xué);2008年

4 楊柳;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的安祖花遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];天津大學(xué);2007年

5 黃麗云;非洲菊高效再生體系的建立與雙抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)化的研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 鄭肖蘭;尖孢鐮刀菌西瓜專(zhuān)化型遺傳轉(zhuǎn)化體系和突變體庫(kù)的建立[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 吳英;蘆薈遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及人胰島素樣生長(zhǎng)因子I轉(zhuǎn)化蘆薈的初步研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 陳亞蘭;馬鈴薯反義PPO基因遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)基因植株P(guān)PO活性、同工酶的分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 梁慧;菊花高頻再生體系建立及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化[D];西南大學(xué);2006年

10 趙振利;根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的反義LEAFY基因?qū)霊意從镜倪z傳轉(zhuǎn)化研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：果樹(shù)轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展與產(chǎn)業(yè)化展望，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：138773