本文關鍵詞：慢病毒介導的多基因聯(lián)合轉染BMSCs注射治療食蟹猴膝關節(jié)炎的實驗研究　出處：《中國修復重建外科雜志》2016年09期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 環(huán)氧合酶 聚蛋白多糖酶 IGF- BMSCs 慢病毒 食蟹猴

【摘要】：目的通過慢病毒介導環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)-si RNA、聚蛋白多糖酶1(Aggrecanase-1)-si RNA、IGF-1基因聯(lián)合轉染BMSCs,將其注射至食蟹猴骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)模型關節(jié)腔,探討對OA相關炎性因子及關節(jié)軟骨的影響。方法取髖關節(jié)OA患者自愿捐贈骨髓組織,分離培養(yǎng)BMSCs。采用基因重組技術構建COX-2-si RNA、Aggrecanase-1-si RNA和IGF-1過表達基因的慢病毒載體,以最佳感染復數(shù)40轉染第3代BMSCs(病毒組),以空慢病毒轉染培養(yǎng)作為對照(空病毒組),以正常BMSCs作為正常對照組。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),并行細胞計數(shù);取轉染培養(yǎng)1周細胞,RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 m RNA的表達。取健康3歲食蟹猴9只,按照Hulth造模法于右膝制備OA模型后,隨機分為3組(n=3)。模型制備術后6周,病毒組及空病毒組右膝關節(jié)腔內分別注射對應的1 m L BMSCs(約1×10~7個),空白對照組注射1 m L生理鹽水。以左膝作為正常對照組。注射后觀察動物一般情況;1、4、6周取雙膝關節(jié)液,ELISA檢測前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、IL-1、Aggrecanase-1、IGF-1濃度;6周時MRI及大體觀察檢查膝關節(jié)軟骨改變,并取材行組織學、免疫組織化學染色觀察,以及RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 m RNA表達。結果轉染后兩組細胞形態(tài)及生長曲線無明顯差異。RT-RCR檢測,與空病毒組、正常對照組比較,病毒組COX-2、Aggrecanase-1表達明顯降低,IGF-1表達明顯增加(P0.05)。細胞注射后各組動物均存活至實驗完成。注射后1、4、6周,病毒組PGE2、Aggrecanase-1、IL-1濃度明顯低于空病毒組、空白對照組,但IGF-1濃度明顯增高(P0.05);但3組以上指標濃度均顯著高于正常對照組(P0.05)。MRI檢查示,與正常對照組比較,病毒組、空病毒組及空白對照組關節(jié)面均出現(xiàn)異常高密度影,但病毒組區(qū)域最小。大體觀察及組織學觀察見,病毒組、空病毒組及空白對照組關節(jié)軟骨符合早期OA改變,但病毒組修復程度優(yōu)于空病毒組及空白對照組,根據(jù)改良Pineda評分標準的組織學評分亦較低,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組織化學染色示,病毒組細胞質染色較空病毒組及空白對照組深,偶爾可見棕黃色顆粒,軟骨細胞較多。RT-PCR檢測,與空病毒和空白對照組相比,病毒組COX-2、Aggrecanase-1 m RNA表達明顯降低,IGF-1 m RNA表達明顯增高(P0.05)。結論慢病毒介導的多基因轉染BMSCs可以有效抑制食蟹猴早期OA模型膝關節(jié)腔內COX-2和Aggrecanse-1的表達,增強IGF-1的表達,降低膝關節(jié)內炎性因子濃度,有效保護關節(jié)軟骨。
[Abstract]:......
【作者單位】： 青島市海慈醫(yī)療集團關節(jié)外科;青島大學附屬醫(yī)院關節(jié)外科;青島市中心(腫瘤)醫(yī)院腫瘤科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81171774、81272056)~~
【分類號】：R684.3
【正文快照】： △共同第一作者骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是機械性和生物性因素共同作用,導致關節(jié)軟骨細胞、細胞外基質等合成和降解失平衡,呈進行性加重的關節(jié)疾病。隨年齡增長OA發(fā)病率逐漸增加,70歲以上人群發(fā)病率高達80%[1-2]。目前OA治療包括非藥物治療、藥物治療、手術治療等,藥物治

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李振宇;慢病毒載體構建及結構優(yōu)化[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年05期

2 主鴻鵠;慢病毒載體及其對低分裂潛能細胞的基因轉移[J];白血病.淋巴瘤;2003年01期

3 楊宇娟,裴冬生,徐開林,潘秀英,何徐彭,張成靜;survivin反義RNA的克隆及慢病毒載體的構建[J];徐州醫(yī)學院學報;2005年06期

4 焦伊勝;王永來;張淑蘭;王桂玲;;凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒載體的構建與鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2008年24期

5 褚波;黃雪峰;唐云明;;慢病毒載體及其應用進展[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2008年01期

6 毛穎佳;鄭源強;石艷春;;慢病毒載體及其應用的研究進展[J];中國生物制品學雜志;2009年02期

7 曾錦芳;王少元;;慢病毒載體及其在血液病研究中的應用進展[J];醫(yī)學綜述;2011年08期

8 馬強;舒文;李明;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的改進[J];熱帶醫(yī)學雜志;2011年08期

9 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應用研究進展[J];包頭醫(yī)學院學報;2011年05期

10 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強;王娟;張敬之;;慢病毒載體轉錄通讀率檢測方法的建立[J];生物工程學報;2013年07期

相關會議論文 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構建及神經干細胞轉染[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構建及其包裝細胞系的建立[A];中華醫(yī)學會第八次全國血液學學術會議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關受體α基因超表達慢病毒載體的構建[A];中華醫(yī)學會第六次全國骨質疏松和骨礦鹽疾病學術會議暨中華醫(yī)學會骨質疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構建[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2010年學術交流會論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構建、改造及其包裝細胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質干細胞的病毒載體研究[A];第十三次全國臨床藥理學學術大會論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構建及其在肝細胞中的表達鑒定[A];中國科協(xié)第十四屆年會第十七分會場環(huán)境危害與健康防護研討會論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構建、改造及其包裝細胞系的建立[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學術論壇交流會暨臨床藥學與藥學服務研究進展培訓班論文集[C];2011年

相關博士學位論文 前10條

1 原莉莉;慢病毒載體介導的HSP47 siRNA抑制PVR的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

2 楊玉芳;用LMP1構建重組慢病毒載體及建立轉基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

3 徐世永;慢病毒載體法高效轉基因雞制備技術研究[D];南京農業(yè)大學;2007年

4 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構建及其功能的相關性研究[D];鄭州大學;2011年

5 吳福國;表達Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構建及其對膀胱癌細胞影響的實驗研究[D];蘭州大學;2007年

6 馬強;腫瘤翻譯調控蛋白（TCTP）對結腸癌細胞LoVo的生物學特性影響及安全型慢病毒載體構建探索[D];南方醫(yī)科大學;2009年

7 郝又國;攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對C型Niemann-Pick病小鼠的神經保護作用[D];華中科技大學;2009年

8 楊歡;慢病毒介導中國人產甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉染肝干細胞的實驗研究[D];華中科技大學;2011年

9 張文卿;HCMV pp150表達及E1-pp65慢病毒載體刺激T細胞免疫應答的研究[D];山東大學;2006年

10 林元邦;改進型復制缺陷性腺病毒（HDAd）轉基因載體特異性及穩(wěn)定性研究[D];天津醫(yī)科大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 熊冬蘭;白細胞介素-18基因慢病毒表達載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構建及在肝癌細胞中的表達與功能初步研究[D];川北醫(yī)學院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過表達載體的構建[D];河北聯(lián)合大學;2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對體外骨髓間充質干細胞向神經細胞分化的影響[D];鄭州大學;2015年

5 王碩;慢病毒介導BMPR Ⅱ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

6 操儲云;4個沉默雞Ii基因慢病毒載體的構建及其效果比較[D];安徽農業(yè)大學;2014年

7 楊碧慧;RNA干擾靶向沉默SPAG6基因對人MDS細胞體內外生長的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 王旋;SIRT2調節(jié)HSP90活性的分子機制[D];河南大學;2015年

9 張U，

本文編號：1348714