本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的多基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染BMSCs注射治療食蟹猴膝關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《中國修復(fù)重建外科雜志》2016年09期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的通過慢病毒介導(dǎo)環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)-si RNA、聚蛋白多糖酶1(Aggrecanase-1)-si RNA、IGF-1基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染BMSCs,將其注射至食蟹猴骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)模型關(guān)節(jié)腔,探討對(duì)OA相關(guān)炎性因子及關(guān)節(jié)軟骨的影響。方法取髖關(guān)節(jié)OA患者自愿捐贈(zèng)骨髓組織,分離培養(yǎng)BMSCs。采用基因重組技術(shù)構(gòu)建COX-2-si RNA、Aggrecanase-1-si RNA和IGF-1過表達(dá)基因的慢病毒載體,以最佳感染復(fù)數(shù)40轉(zhuǎn)染第3代BMSCs(病毒組),以空慢病毒轉(zhuǎn)染培養(yǎng)作為對(duì)照(空病毒組),以正常BMSCs作為正常對(duì)照組。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),并行細(xì)胞計(jì)數(shù);取轉(zhuǎn)染培養(yǎng)1周細(xì)胞,RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 m RNA的表達(dá)。取健康3歲食蟹猴9只,按照Hulth造模法于右膝制備OA模型后,隨機(jī)分為3組(n=3)。模型制備術(shù)后6周,病毒組及空病毒組右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)分別注射對(duì)應(yīng)的1 m L BMSCs(約1×10~7個(gè)),空白對(duì)照組注射1 m L生理鹽水。以左膝作為正常對(duì)照組。注射后觀察動(dòng)物一般情況;1、4、6周取雙膝關(guān)節(jié)液,ELISA檢測前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、IL-1、Aggrecanase-1、IGF-1濃度;6周時(shí)MRI及大體觀察檢查膝關(guān)節(jié)軟骨改變,并取材行組織學(xué)、免疫組織化學(xué)染色觀察,以及RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 m RNA表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞形態(tài)及生長曲線無明顯差異。RT-RCR檢測,與空病毒組、正常對(duì)照組比較,病毒組COX-2、Aggrecanase-1表達(dá)明顯降低,IGF-1表達(dá)明顯增加(P0.05)。細(xì)胞注射后各組動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)完成。注射后1、4、6周,病毒組PGE2、Aggrecanase-1、IL-1濃度明顯低于空病毒組、空白對(duì)照組,但I(xiàn)GF-1濃度明顯增高(P0.05);但3組以上指標(biāo)濃度均顯著高于正常對(duì)照組(P0.05)。MRI檢查示,與正常對(duì)照組比較,病毒組、空病毒組及空白對(duì)照組關(guān)節(jié)面均出現(xiàn)異常高密度影,但病毒組區(qū)域最小。大體觀察及組織學(xué)觀察見,病毒組、空病毒組及空白對(duì)照組關(guān)節(jié)軟骨符合早期OA改變,但病毒組修復(fù)程度優(yōu)于空病毒組及空白對(duì)照組,根據(jù)改良Pineda評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的組織學(xué)評(píng)分亦較低,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組織化學(xué)染色示,病毒組細(xì)胞質(zhì)染色較空病毒組及空白對(duì)照組深,偶爾可見棕黃色顆粒,軟骨細(xì)胞較多。RT-PCR檢測,與空病毒和空白對(duì)照組相比,病毒組COX-2、Aggrecanase-1 m RNA表達(dá)明顯降低,IGF-1 m RNA表達(dá)明顯增高(P0.05)。結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的多基因轉(zhuǎn)染BMSCs可以有效抑制食蟹猴早期OA模型膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)COX-2和Aggrecanse-1的表達(dá),增強(qiáng)IGF-1的表達(dá),降低膝關(guān)節(jié)內(nèi)炎性因子濃度,有效保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨。
[Abstract]:......
【作者單位】： 青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)關(guān)節(jié)外科;青島大學(xué)附屬醫(yī)院關(guān)節(jié)外科;青島市中心(腫瘤)醫(yī)院腫瘤科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171774、81272056)~~
【分類號(hào)】：R684.3
【正文快照】： △共同第一作者骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是機(jī)械性和生物性因素共同作用,導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)等合成和降解失平衡,呈進(jìn)行性加重的關(guān)節(jié)疾病。隨年齡增長OA發(fā)病率逐漸增加,70歲以上人群發(fā)病率高達(dá)80%[1-2]。目前OA治療包括非藥物治療、藥物治療、手術(shù)治療等,藥物治

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9 張U，

本文編號(hào)：1348714