本文關(guān)鍵詞：NK細(xì)胞恢復(fù)及KIR基因分型在allo-HSCT中臨床意義研究　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:研究異基因造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)恢復(fù)情況,分析供受者NK細(xì)胞表面殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)基因型與allo-HSCT后急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,a GVHD)發(fā)生率、總生存率(overall survival,OS)等臨床表現(xiàn)的相關(guān)性。為臨床預(yù)防GVHD和選擇合適供者提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1選擇2014年2月至2015年12月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科進(jìn)行allo-HSCT的38例患者作為研究對(duì)象。2患者的臨床情況2.1 NK細(xì)胞恢復(fù)檢測(cè)患者臨床情況:(1)年齡:中位年齡31.5歲(3-56歲);男性17例,女性21例。(2)疾病診斷及分期:急性白血病(AL)22例,其中第1次完全緩解(CR1)期16例,≥CR2期5例,NR 1例。骨髓增生異常綜合征(MDS)患者6例,其中MDS-RAEBⅠ4例,MDS-RAEBⅡ2例,IPSS-R分期:均為高危;未緩解。T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤2例。重型再生障礙性貧血(SAA)7例。不典型慢性粒細(xì)胞白血病(a CML)1例。(3)研究截止時(shí)間(2015-12-31)。(4)供受者HLA配型:HLA10/10相和非血緣相關(guān)供者(MUD)移植2例,HLA10/10相合親緣供者(MSD)17例,親緣單倍體供者(haplo-HSCT)19例。(5)移植方式:非血緣供者采用外周干細(xì)胞,親緣供者采用骨髓+外周干細(xì)胞(31/36例)/外周干細(xì)胞(5/36例)。(6)對(duì)照組:造血干細(xì)胞健康供者25例。(7)回輸細(xì)胞數(shù):MNC5.84±1.36*10^8/kg,CD34+7.03±3.62*10^6/kg(受者體重)。2.2 KIR基因研究患者臨床情況:(1)年齡:中位年齡為32.5歲(3-52歲);男性14歲,女性14歲。(2)疾病診斷及分期:AL 17例,MDS 4例,T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤1例,SAA 5例,a CML 1例。(3)供受者HLA配型:HLA10/10相和非血緣相關(guān)供者(MUD)移植2例,HLA10/10相合親緣供者(MSD)10例,親緣單倍體供者(haplo-HSCT)16例。(4)移植方式:非血緣供者采用外周干細(xì)胞,親緣供者采用骨髓+外周干細(xì)胞(21/26例)/外周干細(xì)胞(5/26例)。(5)回輸細(xì)胞數(shù):MNC 6.17±1.31*10^8/kg,CD34+7.64±3.28*10^6/kg(受者體重)。2.3診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[1]。(2)a GVHD的診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)符合西雅圖Fred Hutchinson腫瘤分級(jí)法[2]。(3)移植后早期病毒感染:allo-HSCT后100天內(nèi),通過檢測(cè)患者外周血EBV-DNA、CMV-DNA、JCV-DNA、BKV-DNA等拷貝數(shù)大于1×10^3認(rèn)為存在病毒感染。3標(biāo)本采集:患者移植前及移植后滿1、2、3、4.5、6、9、12個(gè)月采取外周血4ml,EDTA抗凝;對(duì)照組在干細(xì)胞動(dòng)員前采血。4流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM;美國(guó)BD公司FACSCantoll流式細(xì)胞儀)檢測(cè)各亞群免疫細(xì)胞數(shù)量變化�？贵w組合:自然殺傷(NK)細(xì)胞:CD16+CD56;B細(xì)胞:CD19;T細(xì)胞:CD3、CD3+CD4、CD3+CD8。5供受者KIR基因分型及KIR遺傳型檢測(cè)采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)法。由上海荻碩貝肯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所協(xié)助檢測(cè)。檢測(cè)內(nèi)容包括16種KIR分子類型及其基因型。6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:計(jì)量資料的組間比較應(yīng)用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料的組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)。P0.05認(rèn)為有顯著性差異。結(jié)果:1 NK細(xì)胞恢復(fù)情況:移植后CD16+CD56+NK細(xì)胞在移植后1個(gè)月時(shí)即恢復(fù)正常水平(448.29±343.36/ul vs 329.32±174.58/ul,P=0.119)。此后不同時(shí)間點(diǎn)均與正常無(wú)差異。2 NK細(xì)胞恢復(fù)與a GVHD:移植后滿1、2、3個(gè)月監(jiān)測(cè)點(diǎn),CD16+CD56+細(xì)胞在a GVHD發(fā)生組較未發(fā)生a GVHD組明顯降低(1m 222.60±148.45/ul vs 581.06±358.64/ul;2m 199.70±139.48/ul vs 474.76±267.28/ul;3m143.88±80.59/ul vs 333.50±180.32/ul);P值分別為0.010、0.002、0.003。提示NK細(xì)胞減低與a GVHD發(fā)生相關(guān)。3 NK細(xì)胞恢復(fù)與疾病復(fù)發(fā):38例患者中,6例患者移植后復(fù)發(fā),其中4位患者NK細(xì)胞檢測(cè)至移植后3個(gè)月。CD16+CD56+細(xì)胞在復(fù)發(fā)組較未復(fù)發(fā)組明顯降低(1m 205.00±182.18/ul vs 555.90±337.03/ul;2m 244.00±89.61/ul vs 402.18±281.19/ul;3m 165.00±61.37/ul vs 281.11±181.86/ul);P值分別為0.040、0.039、0.043。提示NK細(xì)胞減低與移植后復(fù)發(fā)相關(guān)。4 NK細(xì)胞恢復(fù)與移植后早期病毒感染:12/38例患者發(fā)生早期病毒感染,病毒感染組患者移植后1-3個(gè)月時(shí)NK細(xì)胞數(shù)明顯低于無(wú)病毒感染組患者(1m 269.42±257.35/ul vs 644.73±309.92/ul;2m 189.83±130.74/ul vs519.33±251.10/ul;3m 143.40±83.42 vs 365.50±170.84/ul),P值分別為0.002,0.000,0.001,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析顯示NK細(xì)胞減低與移植后早期病毒感染相關(guān)。5 28對(duì)供受者的KIR基因分型與a GVHD發(fā)生,(1)供受者KIR基因型完全相同的占64.3%(18/28例);(2)受者KIR基因型包含供者的占17.9%(5/28例);(3)供者KIR基因型包含受者的占14.3%(4/28例);(4)供受者雙方均含有對(duì)方?jīng)]有的KIR基因型的占3.5%(1/28例);移植物抗宿主方向的(graft-versus-host direction,GVH方向)KIR基因相合率為82.1%(23/28例),KIR不相合率為17.9%(5/28例)。其中KIR基因型相合組a GVHD的發(fā)生率為60.9%(14/23例),KIR基因型不相合組a GVHD的發(fā)生率為0%,(P=0.020),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而供受者KIR基因相合組OS率為69.6%(16/23例),不合組OS率為80.0%(4/5例),(P=0.552),兩者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示KIR基因不合患者a GVHD發(fā)生率減低。6 a GVHD發(fā)生與KIR遺傳型28例患者中,其供者KIR遺傳型為A/A型組和B/X型供者組a GVHD的發(fā)生率分別為65%(13/20例)和12.5%(1/8例);OS率分別為65%(13/20例)和87.5%(7/8例);(P值分別為0.016和0.240)。提示B/X型供者a GVHD的發(fā)生率低于A/A型。7供者活化型KIR-2DS1基因陽(yáng)性時(shí),a GVHD發(fā)生率為14.28%(1/7例),KIR-2DS1為陰性時(shí),a GVHD發(fā)生率為61.9%(13/21例),二者比較P=0.038,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但兩組間OS率71.4%(6/7)vs66.6%(14/21)無(wú)差異(P=0.327)。提示KIR-2DS1陽(yáng)性供者a GVHD發(fā)生率低于KIR-2DS1陰性。結(jié)論:1 allo-HSCT后CD16+CD56+NK細(xì)胞恢復(fù)迅速,1個(gè)月可恢復(fù)至正常水平。2 allo-HSCT后發(fā)生a GVHD患者NK細(xì)胞恢復(fù)緩慢。3出現(xiàn)所檢測(cè)病毒感染患者較未感染者NK細(xì)胞恢復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)。4供受者KIR基因型GVH方向不相合組a GVHD發(fā)生率低于相合組。5供者KIR分子B/X遺傳型較A/A遺傳型a GVHD發(fā)生率較低。6供者NK細(xì)胞活化性KIR-2DS1基因陽(yáng)性時(shí),受者a GVHD發(fā)生率低。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R457.7

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳功強(qiáng);KIR基因型對(duì)異基因造血干細(xì)胞移植結(jié)果的影響及其機(jī)理研究[D];浙江大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：1327673