本文關(guān)鍵詞：人DRD1基因啟動子區(qū)克隆和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的構(gòu)建　出處：《中國組織工程研究》2016年40期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：背景:多巴胺受體啟動子區(qū)多態(tài)性位點的改變會影響受體的表達量,進而影響多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)的作用,導(dǎo)致相關(guān)疾病的發(fā)生。目的:通過克隆人DRD1基因的啟動子區(qū),構(gòu)建含有該基因啟動子序列的雙熒光素酶報告基因載體并檢測其活性,為研究DRD1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控提供基礎(chǔ)工具。方法:以人靜脈血基因組DNA為模板,通過PCR擴增DRD1基因啟動子序列并克隆至pG M-T載體,測序驗證無誤后酶切連接至螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒pG L3-Basic,構(gòu)建含有DRD1基因啟動子的熒光素酶報告基因載體,采用陽離子脂質(zhì)體法與內(nèi)對照質(zhì)粒pG L3-TK共轉(zhuǎn)染HEK293細胞同時以不含啟動子的pG L3-Basic載體與內(nèi)對照質(zhì)粒pG L3-TK共轉(zhuǎn)染作為陰性對照組,化學(xué)發(fā)光儀檢測相對熒光強度。結(jié)果與結(jié)論:(1)通過酶切和測序驗證重組熒光素酶報告基因載體的DRD1基因啟動子區(qū)序列正確;(2)與陰性對照組相比,該重組載體轉(zhuǎn)染HEK293細胞后具有轉(zhuǎn)錄活性;(3)成功構(gòu)建了含有DRD1基因啟動子區(qū)的熒光素酶報告基因載體,為研究該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控提供了基礎(chǔ)工具。
【作者單位】： 沈陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院毒理教研室;
【基金】：遼寧省教育廳一般項目(L2012375)~~
【分類號】：R363
【正文快照】： 文章快速閱讀: 人DRD1基因啟動子區(qū)克隆和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的構(gòu)建 PCR擴增目的片段切膠純化 3’端加ApG M-T載體 構(gòu)建TA克隆轉(zhuǎn)化感受態(tài),篩選陽性克隆 檢測熒光素酶表達活性構(gòu)建pG L3重組載體KpnⅠ和BglⅡ雙酶切TA載體pG L3熒光素酶 文題釋義: 多巴胺受體:多巴胺

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本文編號：1313714