本文關鍵詞：人DRD1基因啟動子區(qū)克隆和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的構建　出處：《中國組織工程研究》2016年40期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：背景:多巴胺受體啟動子區(qū)多態(tài)性位點的改變會影響受體的表達量,進而影響多巴胺能神經遞質的作用,導致相關疾病的發(fā)生。目的:通過克隆人DRD1基因的啟動子區(qū),構建含有該基因啟動子序列的雙熒光素酶報告基因載體并檢測其活性,為研究DRD1基因的轉錄調控提供基礎工具。方法:以人靜脈血基因組DNA為模板,通過PCR擴增DRD1基因啟動子序列并克隆至pG M-T載體,測序驗證無誤后酶切連接至螢火蟲熒光素酶報告基因質粒pG L3-Basic,構建含有DRD1基因啟動子的熒光素酶報告基因載體,采用陽離子脂質體法與內對照質粒pG L3-TK共轉染HEK293細胞同時以不含啟動子的pG L3-Basic載體與內對照質粒pG L3-TK共轉染作為陰性對照組,化學發(fā)光儀檢測相對熒光強度。結果與結論:(1)通過酶切和測序驗證重組熒光素酶報告基因載體的DRD1基因啟動子區(qū)序列正確;(2)與陰性對照組相比,該重組載體轉染HEK293細胞后具有轉錄活性;(3)成功構建了含有DRD1基因啟動子區(qū)的熒光素酶報告基因載體,為研究該基因的轉錄調控提供了基礎工具。
【作者單位】： 沈陽醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院毒理教研室;
【基金】：遼寧省教育廳一般項目(L2012375)~~
【分類號】：R363
【正文快照】： 文章快速閱讀: 人DRD1基因啟動子區(qū)克隆和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的構建 PCR擴增目的片段切膠純化 3’端加ApG M-T載體 構建TA克隆轉化感受態(tài),篩選陽性克隆 檢測熒光素酶表達活性構建pG L3重組載體KpnⅠ和BglⅡ雙酶切TA載體pG L3熒光素酶 文題釋義: 多巴胺受體:多巴胺

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本文編號：1313714