本文關(guān)鍵詞：蘋果己糖激酶基因MdHXK1的克隆、表達(dá)分析與功能鑒定　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本研究以‘嘎拉’蘋果(Malus×domestica Borkh.)為研究材料,通過克隆獲得了蘋果己糖激酶基因MdHXK1,并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)和Southern blotting分析,利用qRT-PCR技術(shù)對(duì)其在不同組織、生長(zhǎng)期和逆境條件下的表達(dá)水平,以及果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期內(nèi)MdHXK1葡萄糖磷酸化相對(duì)酶活性和葡萄糖積累進(jìn)行了檢測(cè),通過原核誘導(dǎo)獲得了重組蛋白,并獲得了過表達(dá)蘋果己糖激酶基因MdHXK1的轉(zhuǎn)基因擬南芥株系,旨在為進(jìn)一步深入研究蘋果己糖激酶的功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)獲得了蘋果己糖激酶基因MdHXK1(基因序列號(hào):MDP0000309677)的全長(zhǎng)cDNA,測(cè)序發(fā)現(xiàn)其完整的開放閱讀框?yàn)?497 bp,編碼499個(gè)氨基酸;關(guān)鍵基序和氨基酸殘基在AtHXK1、AtHXK2和MdHXK1序列間十分保守;結(jié)構(gòu)域分析表明,MdHXK1蛋白含有Hexokinase_1和Hexokinase_2兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域;分析MdHXK1基因啟動(dòng)子序列發(fā)現(xiàn)其含有與抗逆、糖信號(hào)及激素信號(hào)相關(guān)的順式作用元件。(2)Southern blotting結(jié)果表明,蘋果基因組中MdHXK1有一個(gè)拷貝;MdHXK1定位于蘋果基因組的第15號(hào)染色體上,具有9個(gè)外顯子;亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果表明,蘋果MdHXK1蛋白在大部分亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有分布。(3)qRT-PCR結(jié)果顯示,MdHXK1在蘋果的莖和花中表達(dá)量較高;在蘋果果實(shí)發(fā)育期間,MdHXK1基因的表達(dá)、MdHXK1葡萄糖磷酸化相對(duì)酶活性和葡萄糖積累水平都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì);MdHXK1基因的表達(dá)明顯受鹽、低溫和ABA的誘導(dǎo)。(4)6%葡萄糖處理?xiàng)l件下,過表達(dá)MdHXK1轉(zhuǎn)基因擬南芥株系明顯表現(xiàn)出強(qiáng)烈的糖超敏感表型,子葉、下胚軸和根嚴(yán)重發(fā)育不良,表明蘋果己糖激酶基因MdHXK1參與到葡萄糖對(duì)種子萌發(fā)后幼苗生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S661.1

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本文編號(hào)：1310634