本文關(guān)鍵詞：金龍膽草鯊烯環(huán)氧酶基因的克隆及原核表達(dá)

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【摘要】：本研究根據(jù)金龍膽草轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選獲得了皂苷合成途徑的一個(gè)關(guān)鍵酶基因——鯊烯環(huán)氧酶(SQE)。以篩選獲得的基因序列,設(shè)計(jì)帶有限制性內(nèi)切酶Bam HⅠ和XhoⅠ位點(diǎn)的特異引物,通過(guò)RT-PCR方法對(duì)SQE基因進(jìn)行克隆,并利用限制性內(nèi)切酶和T4連接酶的共同作用,構(gòu)建p ET30b(+)-SQE原核表達(dá)載體,導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)宿主細(xì)胞中,當(dāng)OD600達(dá)到0.6時(shí)加入終濃度為1 mmol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),最終以SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)檢測(cè)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明本研究成功克隆了金龍膽草鯊烯環(huán)氧酶基因(Cb SQE),該基因開(kāi)放閱讀框?yàn)? 575 bp,編碼525個(gè)氨基酸。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析顯示Cb SQE與毛曼陀羅及絞股藍(lán)SQE基因親緣關(guān)系比較近;酶切及測(cè)序結(jié)果表明,成功構(gòu)建了Cb SQE基因原核表達(dá)載體;SDS-PAGE顯示成功誘導(dǎo)表達(dá)了Cb SQE融合蛋白,蛋白分子量為57 k D,與理論預(yù)測(cè)結(jié)果相符合。本研究結(jié)果為解析金龍膽草的皂苷合成途徑提供了一定的理論依據(jù)。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;攀枝花學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院;
【基金】：四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(16ZA0409)資助
【分類號(hào)】：S567.219;Q943.2
【正文快照】： Cloning and Prokaryotic Expression of Squalene Epoxidase Gene fromConyza blinii H.LévSun Rong1Luo Ji1Liu Shan2Tang Zizhong1Fan Mingliang1Li Chenglei1Chen Hui1*1 College of Life Science,Sichuan Agricultural University,Ya'an,625014;2 Department of Biologi

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本文編號(hào)：1301956