本文關鍵詞：非受體型酪氨酸激酶JAK1基因真核表達質粒的構建與真核表達

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【摘要】：[目的]構建非受體型酪氨酸激酶JAK1(nonreceptor tyrosine kinase-JAK1)基因真核表達質粒pcDNA4.0-HisJAK1,并轉染293T細胞進行真核表達。[方法]從Hela細胞中提取總的RNA,通過RT-PCR獲得JAK1基因全長c DNA序列,并將其克隆至真核表達載體pcDNA4.0-His中,構建重組質粒pcDNA4.0-His-JAK1。將真核重組表達質粒轉染293T細胞,轉染48 h后,在熒光顯微鏡下觀察轉染情況。免疫印跡法檢測JAK1蛋白轉染24 h、36 h與48 h在293T細胞中的表達。[結果]經(jīng)雙酶切與質粒PCR鑒定質�？寺≌_,測序鑒定序列中第2199位堿基A突變?yōu)镚,為同義突變,不影響氨基酸序列。轉染293T細胞48 h后,間接免疫熒光實驗顯示在293T細胞中檢測到綠色熒光。免疫印跡檢測可見大小約為133 kDa的目的蛋白。[結論]成功獲得JAK1基因全長序列,并成功構建pcDNA4.0-HisJAK1真核重組表達質粒,并在真核細胞293T中獲得有效表達,為進一步研究JAK1蛋白質相互作用奠定了基礎。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學生物技術學院抗體工程研究所;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(“蛋白質相互作用均相發(fā)光分析儀器和配套試劑研究”,No.2014AA020904)資助
【分類號】：Q78
【正文快照】： JAK(Janus kinase)是一類非受體型酪氨酸激酶(PTK),JAK蛋白家族包括4個成員:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK家族是細胞因子、生長因子和干擾素的重要信號傳感器[1-2],參與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生發(fā)展。主要途徑通過細胞因子、生長因子等因子與受體結合,激活JAK,JAK的活化促進了下游

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 喬燕燕;JAK1、P-STAT3和BCL-2在胃癌中的表達及意義[D];內(nèi)蒙古醫(yī)學院;2008年

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本文編號：1275662