本文關(guān)鍵詞：非受體型酪氨酸激酶JAK1基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與真核表達(dá)

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【摘要】：[目的]構(gòu)建非受體型酪氨酸激酶JAK1(nonreceptor tyrosine kinase-JAK1)基因真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA4.0-HisJAK1,并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行真核表達(dá)。[方法]從Hela細(xì)胞中提取總的RNA,通過(guò)RT-PCR獲得JAK1基因全長(zhǎng)c DNA序列,并將其克隆至真核表達(dá)載體pcDNA4.0-His中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA4.0-His-JAK1。將真核重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48 h后,在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況。免疫印跡法檢測(cè)JAK1蛋白轉(zhuǎn)染24 h、36 h與48 h在293T細(xì)胞中的表達(dá)。[結(jié)果]經(jīng)雙酶切與質(zhì)粒PCR鑒定質(zhì)粒克隆正確,測(cè)序鑒定序列中第2199位堿基A突變?yōu)镚,為同義突變,不影響氨基酸序列。轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后,間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示在293T細(xì)胞中檢測(cè)到綠色熒光。免疫印跡檢測(cè)可見(jiàn)大小約為133 kDa的目的蛋白。[結(jié)論]成功獲得JAK1基因全長(zhǎng)序列,并成功構(gòu)建pcDNA4.0-HisJAK1真核重組表達(dá)質(zhì)粒,并在真核細(xì)胞293T中獲得有效表達(dá),為進(jìn)一步研究JAK1蛋白質(zhì)相互作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院抗體工程研究所;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(“蛋白質(zhì)相互作用均相發(fā)光分析儀器和配套試劑研究”,No.2014AA020904)資助
【分類(lèi)號(hào)】：Q78
【正文快照】： JAK(Janus kinase)是一類(lèi)非受體型酪氨酸激酶(PTK),JAK蛋白家族包括4個(gè)成員:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK家族是細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和干擾素的重要信號(hào)傳感器[1-2],參與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生發(fā)展。主要途徑通過(guò)細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等因子與受體結(jié)合,激活JAK,JAK的活化促進(jìn)了下游

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 喬燕燕;JAK1、P-STAT3和BCL-2在胃癌中的表達(dá)及意義[D];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院;2008年

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本文編號(hào)：1275662