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MicroRNA-133b-5p通過靶向調(diào)控Fas基因影響H9c2心肌細胞凋亡

發(fā)布時間:2017-12-08 15:20

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  更多相關(guān)文章: 心肌細胞 微小RNAs 乳酸脫氫酶 凋亡 Fas


【摘要】:目的研究microRNA(miR)-133b-5p在H9c2心肌細胞凋亡中發(fā)揮的作用及其靶向調(diào)控Fas基因的機制。方法取對數(shù)生長期大鼠H9c2胚胎心肌細胞,分為空白對照組、miR-133b-5p抑制劑組、抑制劑陰性對照組。分別轉(zhuǎn)染48 h后收集細胞,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-133b-5p表達,微板法檢測細胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性,Annexin V-FITC聯(lián)合PI雙染流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證miR-133b-5p與Fas mRNA的3'UTR區(qū)的靶向結(jié)合。最后運用qRT-PCR和Westernblot分別檢測各組Fas mRNA與Fas蛋白表達水平。結(jié)果miR-133b-5p抑制劑組細胞內(nèi)miR-133b-5p表達水平下調(diào)至空白對照組的33%(P0.05);LDH活性升高,細胞凋亡率增加,均明顯高于空白對照組與抑制劑陰性對照組(P0.05)。雙熒光素酶報告基因證明Fas是miR-133b-5p的一個靶基因;miR-133b-5p inhibitor顯著上調(diào)Fas mRNA和Fas蛋白水平(P0.05)。結(jié)論利用化學(xué)合成miR-133b-5p inhibitor抑制大鼠H9c2心肌細胞中miR-133b-5p表達,可誘導(dǎo)心肌細胞損傷和凋亡,其機制可能與調(diào)控靶基因Fas表達有關(guān)。
【作者單位】: 安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院麻醉科;
【基金】:安徽高校省級自然科學(xué)研究重大項目(編號:KJ2014ZD16) 安徽省科技廳年度重點項目(編號:1301043030)
【分類號】:R542.2
【正文快照】: blot分別檢測各組Fas mRNA與Fas蛋白表達水平。結(jié)果miR-133b-5p抑制劑組細胞內(nèi)miR-133b-5p表達水平下調(diào)至空白對照組的33%(P0.05);LDH活性升高,細胞凋亡率增加,均明顯高于空白對照組與抑制劑陰性對照組(P0.05)。雙熒光素酶報告基因證明Fas是miR-133b-5p的一個靶基因;miR-133

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6 郁U,

本文編號:1266862


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