本文關(guān)鍵詞：家蠶桿狀病毒bro-d基因缺失對(duì)病毒基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)bro(baculovirus repeated ORF)-d基因普遍存在于多種感染鱗翅目昆蟲(chóng)的多角體病毒基因組中,是桿狀病毒中一類(lèi)重復(fù)開(kāi)放閱讀框序列。為了解bro-d基因在病毒感染過(guò)程中的作用及其與宿主細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,本研究利用Red重組技術(shù)敲除Bm NPV基因組中的bro-d基因,構(gòu)建基因缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid,并將該缺失型病毒轉(zhuǎn)染家蠶Bm N細(xì)胞,利用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)bro-d基因的缺失對(duì)病毒基因組復(fù)制、轉(zhuǎn)錄水平以及抑制凋亡蛋白2基因(inhibitor of apoptosis protein 2,iap2)的影響。結(jié)果顯示,bro-d基因缺失后會(huì)導(dǎo)致病毒基因組的復(fù)制水平顯著下降(P0.05),同時(shí)病毒的早期基因lef-3、晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉(zhuǎn)錄水平也都顯著下降(P0.05);iap2的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)(P0.05)。在bro-d基因缺失型病毒的復(fù)制水平明顯低于野生型病毒的情況下,仍會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力顯著下降(P0.05);bro-d基因缺失引起細(xì)胞B淋巴細(xì)胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量明顯低于野生型病毒,而B(niǎo)cl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)含量顯著高于野生型病毒(P0.05),進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡水平上升。結(jié)果表明,bro-d基因不僅對(duì)病毒各時(shí)期基因表達(dá)水平具有調(diào)控作用,也可通過(guò)調(diào)控iap2的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控宿主細(xì)胞的凋亡水平。研究成果為深入了解bro-d基因在病毒感染過(guò)程中的功能提供了基礎(chǔ)資料,也為通過(guò)延長(zhǎng)宿主細(xì)胞壽命、提高目的蛋白表達(dá)產(chǎn)量來(lái)進(jìn)行桿狀病毒表達(dá)載體的改造提供了新思路。
【作者單位】： 浙江理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/浙江省家蠶生物反應(yīng)器和生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)項(xiàng)目(No.2011AA100603) 浙江理工大學(xué)521人才培養(yǎng)計(jì)劃
【分類(lèi)號(hào)】：Q939.4
【正文快照】： 昆蟲(chóng)桿狀病毒是一類(lèi)專(zhuān)性寄生于鱗翅目昆蟲(chóng)且家族成員龐大的DNA病毒。2008年的主要病毒名錄中昆蟲(chóng)桿狀病毒分為4個(gè)屬:α、β、δ和γ桿狀病毒屬,其中α桿狀病毒屬包含了核型多角體病毒屬(Nucleopolyhedrovirus,NPV)(景天忠等,2011)。苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa cal

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