本文關鍵詞：改性魔芋葡甘露聚糖對齊口裂腹魚免疫及相關基因表達的影響

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【摘要】：為研究低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖(LOKGM)及氧化魔芋葡甘露聚糖硫酸酯(OKGMS)對齊口裂腹魚生長、臟器指數(shù)、血清免疫及抗氧化指標及免疫相關基因表達的影響,為OKGMS及LOKGM在功能性食品中的應用提供理論依據(jù),選取平均質量為81.00±2.48 g的健康齊口裂腹魚420尾,隨機分為7組,每組3個重復�；A組飼喂基礎飼料,試驗組在基礎飼料中各組分別添加0.4% LOKGM、0.8% LOKGM、 1.6% LOKGM 及 0.4% OKGMS、0.8% OKGMS、1.6% OKGMS。飼喂60 d后,測定特定生長率、肥滿度、中腎指數(shù)、頭腎指數(shù)、肝體比、脾體指數(shù)、腸體指數(shù)和腸長指數(shù)；按照試劑盒說明書測定溶菌酶(LZM)、補體旁路途徑溶血活性(ACH50)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、免疫球蛋白M (IgM)及丙二醛(MDA)含量；熒光定量PCR測定頭腎、中腎、腸道、肝臟和脾臟中Toll樣受體22(tlr22)、髓樣分化因子88(myd88)、干擾素調節(jié)因子7(irf7)、1型干擾素(I-ifn)、轉化生長因子β1 (tgf-β1)基因表達水平。研究結果如下：1.在生長及臟器指數(shù)方面,日糧添加不同劑量OKGMS 與 LOKGM對齊口裂腹魚特定生長率、肥滿度、中腎指數(shù)、頭腎指數(shù)、肝臟指數(shù)、腸體指數(shù)、腸長指數(shù)均無顯著影響(p0.05), OKGMS1.6組顯著提高齊口裂腹魚脾體指數(shù)(p0.05)。2.在血清抗氧化指標方面,OKGMS與LOKGM均能提高血清SOD活性,且OKGMS各劑量組均達到顯著水平；與對照組相比,OKGMS0.4、OKGMS0.8、LOKGM0.4、 LOKGM0.8組均能顯著降低齊口裂腹魚血清MDA的含量(p0.05),說明OKGMS與LOKGM對血清MDA的含量有一定的影響；LOKGM0.8、LOKGM1.6組血清中GSH-Px含量顯著高于對照組(p0.05),其他組均無顯著影響。3.在血清免疫指標方面,與對照組相比,OKGMS1.6組能顯著提高齊口裂腹魚血清IgM活性與ACH50含量(p0.05),其他劑量組均可提高血清IgM含量,但未達到顯著水平；OKGMS1.6與OKGM0.8組能顯著提高齊口裂腹魚血清中LSZ含量(p0.05)。4.在引物設計及驗證方面,參照NCBI鯉魚、斑馬魚、草魚等鯉科魚免疫相關基因序列設計引物,成功克隆得到tl r22、myd88、irf7、I-ifn 和tgf-β1的基因片段,分別為174bp、125bp、142bp、192bp和190bp,分別編碼58、41、47、64和63個氨基酸。從氨基酸序列比對結果及進化樹分析來看,tlr22、myd88、irf7、I-ifn 與 tgf-β1基因與鯉科魚氨基酸序列相似度較高,親緣關系也較近。5.在免疫相關基因表達方面,OKGMS能顯著提高頭腎、中腎、腸道、肝臟中thr22基因相對表達量(p0.05),對脾臟tlr22表達量無顯著影響(p0.05), LOKGM能顯著上調對頭腎、中腎、腸道、肝臟、脾臟各組織中tlr22基因相對表達量(p0.05)；OKGMS能顯著上調中腎、腸道、肝臟中myd88基因相對表達量(p0.05),對頭腎和脾臟myd88基因相對表達量無顯著影響(p0.05), LOKGM能顯著提高頭腎、腸道中myd88基因相對表達量(p0.05)；對中腎、肝臟、脾臟中myd88基因相對表達量無顯著影響(p0.05); OKGMS顯著提高齊口裂腹魚中腎、肝臟、脾臟中irf7基因相對表達量影響顯著(p0.05)對頭腎和腸道中irf7基因相對表達量影響不顯著(p0.05), LOKGM能顯著提高齊口裂腹魚腸道、肝臟、脾臟中irf7基因相對表達量(p0.05),對頭腎和中腎中irf7基因相對表達量無顯著影響(p0.05); OKGMS對齊口裂腹魚頭腎I-ifn基因相對表達量無顯著影響(p0.05),顯著上調中腎、腸道、肝臟、脾臟中I-ifn基因相對表達量(p0.05), LOKGM能顯著提高齊口裂腹魚中腎、腸道、脾臟中I-ifn基因相對表達量(p0.05),對頭腎和肝臟中I-ifn基因相對表達量無顯著影響(p0.05); OKGMS顯著下調頭腎、腸道、肝臟中tgf-/β1基因相對表達量(p0.05),對中腎、脾臟中tgf-β1基因相對表達量無顯著影響(p0.05), LOKGM顯著下調齊口裂腹魚頭腎、中腎、肝臟中tgf-β1基因相對表達量(p0.05),對腸道、脾臟中tgf-β1基因相對表達量無顯著影響(p0.05)。因此,我們得出如下結論：日糧中添加一定劑量OKGMS及LOKGM寸齊口裂腹魚生長及臟器指數(shù)影響較小,僅OKGMS1.6組顯著提高齊口裂腹魚脾體指數(shù);OKGMS對齊口裂腹魚血清SOD活性影響顯著；與對照組相比,OKGMS及LOKGM低劑量和中劑量均能顯著降低齊口裂腹魚血清MDA的含量；LOKGM0.8、LOKGM1.6對血清中GSH-Px含量影響顯著；日糧中添加OKGMS和LOKGM會上調齊口裂腹魚tlr22、myd88、irf7、I-ifn基因在頭腎、中腎、腸道、肝臟和脾臟中的表達,下調組織中tgf-β1的相對表達量,其中LOKGM0.8與OKGMS0.4最為顯著。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：1247313