本文關鍵詞：甲苯咪唑作用小林三代蟲（Gyradactylus Kobayashii）差異表達基因的轉(zhuǎn)錄組分析

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【摘要】：魚類的三代蟲病是三代蟲屬(Gyrodactylus)種類寄生在魚體表、鰓部引起的一種常見病害,大量寄生導致寄主機體損傷、鰓呼吸困難,繼而誘發(fā)細菌、病毒等病原微生物感染,往往給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了很大危害和經(jīng)濟損失。甲苯咪唑是漁業(yè)生產(chǎn)中常見一種殺蟲劑,對三代蟲、指環(huán)蟲等單殖吸蟲引起的病害具有良好的作用。大量研究發(fā)現(xiàn),較低濃度的甲苯咪唑?qū)θx就有很好的殺滅效果,但是其作用機制尚不明確。對甲苯咪唑殺蟲機制的研究,對今后抗蟲漁藥的研究和開發(fā)具有很好指導作用。本試驗以寄生在金魚的小林三代蟲(Gyradactylus kobayashii)為研究對象,基于轉(zhuǎn)錄組測序和實時定量PCR技術,通過對三代蟲藥物處理、RNA的提取、轉(zhuǎn)錄組測序和驗證分析基因表達變化,為進一步進行研究甲苯咪唑抗三代蟲的分子機制提供基礎資料。取得的主要結果為:1.轉(zhuǎn)錄組測序結果與數(shù)據(jù)分析:使用0.1 mg/L甲苯咪唑藥浴感染小林三代蟲的金魚12h,采集小林三代蟲并提取RNA,進行轉(zhuǎn)錄組測序。轉(zhuǎn)錄組測序結果為:經(jīng)過數(shù)據(jù)分析得到差異顯著基因(P0.05)有141個,從中篩去魚類和細菌等非目的基因,得到了9個目的基因;結合基因功能篩選得到了7個目的基因,一共篩選出16個目的基因。2.篩選三代蟲內(nèi)參基因:從18S,5.8S,28S,β-Tubulin,Actin,GAPDH,UBC,COX1,ELF這9個內(nèi)參基因中篩選。使用濃度0.05mg/L、0.1mg/L的甲苯咪唑藥浴感染小林三代蟲的金魚,藥浴的時間均為6 h和12 h,通過實時定量PCR和三個內(nèi)參基因評價軟件(geNorm,NormFinder和BestKeeper)對內(nèi)參基因綜合評價。結果表明:β-Tubulin是甲苯咪唑處理下小林三代蟲穩(wěn)定的內(nèi)參基因。3.轉(zhuǎn)錄組測序結果的驗證:使用濃度0.05mg/L、0.1mg/L的甲苯咪唑藥浴感染小林三代蟲的金魚,藥浴的時間均為6 h和12 h,通過實時定量PCR檢測三代蟲目的基因的表達情況。結果顯示:在16個目的基因中,有8個基因有較高的表達量。其中有4個差異顯著(P0.05)的基因表達量較高,且全部與轉(zhuǎn)錄組測序結果一致,使轉(zhuǎn)錄組測序的結果得到有效驗證。有4個目的基因(TF002、TF004、TF005和TG004)在不同的濃度和時間的處理組之間顯示出表達量變化上的規(guī)律性,推測與甲苯咪唑?qū)π×秩x的作用機制具有相關性。根據(jù)甲苯咪唑的作用機制,結合轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)和實時定量PCR數(shù)據(jù),推測TF002和TF005與免疫系統(tǒng)過程相關,TF004與甲苯咪唑濃度正相關;TG004為α-甘露糖苷酶II,其所在的N—聚糖生物合成通路在甲苯咪唑處理下均出現(xiàn)表達上調(diào),與甲苯咪唑的作用機制緊密相關。綜上所述,α-甘露糖苷酶II可能與甲苯咪唑?qū)π×秩x的作用機制相關,研究結果為甲苯咪唑抗三代蟲的分子機制提供理論基礎。
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S941.5

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本文編號：1235132