本文關(guān)鍵詞：小鼠FABP4基因啟動子驅(qū)動紅色熒光蛋白載體的構(gòu)建及在牛體細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：小鼠脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)的啟動子/增強(qiáng)子元件是脂肪組織特異性啟動元件,為了鑒定該元件在牛體細(xì)胞中的啟動效果,首先以小鼠肝臟DNA為模板,通過PCR克隆得到5.9 kb的FABP4基因啟動子片段,連入p MD19-T載體后進(jìn)行酶切及測序鑒定,經(jīng)Eco T 22I酶切去除非核心啟動子區(qū)后精簡為2.3 kb的片段,通過SacⅡ酶切將5.9 kb片段和2.3 kb片段的啟動子連入紅色熒光蛋白載體p Ds-Red 2-1的多克隆位點(diǎn),構(gòu)建為表達(dá)質(zhì)粒p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,利用脂質(zhì)體法將上述載體分別轉(zhuǎn)染牛脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞及牛胎兒成纖維細(xì)胞,24 h后實(shí)時定量PCR檢測紅色熒光蛋白轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明,克隆得到的5.9 kb小鼠FABP4啟動子片段酶切及測序結(jié)果正確,與紅色熒光蛋白載體相連的載體p MF5.9-Red和p MF2.3-Red酶切結(jié)果與預(yù)期相符,表達(dá)載體構(gòu)建成功,實(shí)時定量PCR結(jié)果顯示以上2種細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后24 h紅色熒光蛋白均有表達(dá),且p MF2.3-Red的轉(zhuǎn)錄水平是p MF5.9-Red的2倍以上。成功構(gòu)建了小鼠FABP4啟動子驅(qū)動紅色熒光蛋白表達(dá)載體p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,5.9 kb片段和2.3 kb片段均可驅(qū)動外源基因在牛體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄,且2.3 kb片段啟動效率高于5.9 kb片段。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古大學(xué)哺乳動物生殖生物學(xué)及生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)(2014ZX08010005)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 用組織特異性啟動子與增強(qiáng)子作為轉(zhuǎn)錄啟始元件調(diào)控目的基因的表達(dá),是動物基因工程中限定外源基因時空特異性表達(dá)常用的手段,在應(yīng)用上比較成熟的如乳腺特異型(酪蛋白、乳球蛋白)、肌肉特異型(肌動蛋白、肌酸激酶、生肌因子家族)、肝臟特異型(TTR)、生殖細(xì)胞特異型(Oct-4)、毛囊

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本文編號：1221638