發(fā)布時(shí)間：2017-11-23 02:03

  本文關(guān)鍵詞：AtMYB32對(duì)AtGA20ox1基因表達(dá)的調(diào)控及在植物抗脅迫中的作用研究

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【摘要】：赤霉素(Gibberellin, GA)是一類(lèi)重要的植物內(nèi)源激素,它參與調(diào)節(jié)植物各個(gè)階段的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程及對(duì)不同逆境脅迫的響應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中通過(guò)酵母單雜交的方法篩選到與AtGA20ox1啟動(dòng)子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32,并采用CPRG法定量分析測(cè)定了AtGA20ox1啟動(dòng)子與AtMYB32勺作用強(qiáng)度。為了進(jìn)一步驗(yàn)證兩者在植物體內(nèi)的結(jié)合作用并研究轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32的生物學(xué)功能,本論文開(kāi)展了相關(guān)實(shí)驗(yàn)并獲得以下結(jié)果：(1)篩選鑒定獲得三個(gè)AtMYB32過(guò)表達(dá)株系：AtMYB32ox3、AtMYB32ox6和AtMYB32ox8;鑒定獲得一個(gè)AtMYB32缺失突變體atmyb32-1。(2)成功構(gòu)建p GreenⅡ 0800-LUC-pGA20ox1表達(dá)載體,通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)AtMYB32與AtGA20ox1的啟動(dòng)子在植物體內(nèi)結(jié)合,并抑制該基因的表達(dá)；通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32與AtGA20ox1啟動(dòng)子上的MYB結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。(3)采用生物信息學(xué)方法分析了轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32的基本理化性質(zhì)、在細(xì)胞中的定位以及在不同組織部位中的表達(dá),通過(guò)35S::AtMYB32-GFP農(nóng)桿菌液注射煙草瞬時(shí)表達(dá)證實(shí)AtMYB32定位于細(xì)胞核中。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析AtMYB32在擬南芥不同組織器官中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)AtMYB32在各個(gè)組織中均有表達(dá),其中在花與果莢中表達(dá)水平較高。對(duì)野生型擬南芥Co1-4幼苗浸泡250mM NaCl、300mM甘露醇(mannitol)進(jìn)行脅迫處理或取其成熟蓮座葉片進(jìn)行干旱處理,檢測(cè)AtMYB32基因的表達(dá),結(jié)果表明AtMYB32的表達(dá)受NaCl、甘露醇及干旱處理的誘導(dǎo),推測(cè)AtMYB32可能參與擬南芥的滲透脅迫過(guò)程。(4)分別測(cè)量統(tǒng)計(jì)過(guò)表達(dá)株系、缺失突變體株系及野生型在NaCl和甘露醇處理?xiàng)l件下的子葉變綠速率及主根根長(zhǎng),發(fā)現(xiàn)脅迫條件下過(guò)表達(dá)株系的子葉變綠速度比野生型快,主根比野生型長(zhǎng)；而突變體則相反。(5)分別觀察統(tǒng)計(jì)過(guò)表達(dá)株系、缺失突變體株系以及野生型在干旱處理前后植株的成活情況、不同濃度ABA處理時(shí)的氣孔開(kāi)度及葉片的失水率,發(fā)現(xiàn)與野生型相比,過(guò)表達(dá)株系的抗干旱能力增強(qiáng),ABA處理時(shí)氣孔閉合速度快,且在相同處理時(shí)間失水率比野生型低：而缺失突變體則相反。定量分析鹽處理后過(guò)表達(dá)株系、缺失突變體株系以及野生型中滲透脅迫響應(yīng)關(guān)鍵基因RD29A、RD29B的表達(dá),發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)株系中RD29A、RD29B的表達(dá)量比野生型中高,缺失突變體則相反,表明AtMYB32在擬南芥抗?jié)B透脅迫過(guò)程中起正向調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2
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本文編號(hào)：1216804