本文關(guān)鍵詞：AtMYB32對AtGA20ox1基因表達的調(diào)控及在植物抗脅迫中的作用研究

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【摘要】：赤霉素(Gibberellin, GA)是一類重要的植物內(nèi)源激素,它參與調(diào)節(jié)植物各個階段的生長發(fā)育過程及對不同逆境脅迫的響應。本實驗室在前期研究中通過酵母單雜交的方法篩選到與AtGA20ox1啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32,并采用CPRG法定量分析測定了AtGA20ox1啟動子與AtMYB32勺作用強度。為了進一步驗證兩者在植物體內(nèi)的結(jié)合作用并研究轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32的生物學功能,本論文開展了相關(guān)實驗并獲得以下結(jié)果：(1)篩選鑒定獲得三個AtMYB32過表達株系：AtMYB32ox3、AtMYB32ox6和AtMYB32ox8;鑒定獲得一個AtMYB32缺失突變體atmyb32-1。(2)成功構(gòu)建p GreenⅡ 0800-LUC-pGA20ox1表達載體,通過雙熒光素酶實驗進一步證實AtMYB32與AtGA20ox1的啟動子在植物體內(nèi)結(jié)合,并抑制該基因的表達；通過染色質(zhì)免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32與AtGA20ox1啟動子上的MYB結(jié)合位點結(jié)合。(3)采用生物信息學方法分析了轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32的基本理化性質(zhì)、在細胞中的定位以及在不同組織部位中的表達,通過35S::AtMYB32-GFP農(nóng)桿菌液注射煙草瞬時表達證實AtMYB32定位于細胞核中。采用實時熒光定量PCR技術(shù)分析AtMYB32在擬南芥不同組織器官中的表達,發(fā)現(xiàn)AtMYB32在各個組織中均有表達,其中在花與果莢中表達水平較高。對野生型擬南芥Co1-4幼苗浸泡250mM NaCl、300mM甘露醇(mannitol)進行脅迫處理或取其成熟蓮座葉片進行干旱處理,檢測AtMYB32基因的表達,結(jié)果表明AtMYB32的表達受NaCl、甘露醇及干旱處理的誘導,推測AtMYB32可能參與擬南芥的滲透脅迫過程。(4)分別測量統(tǒng)計過表達株系、缺失突變體株系及野生型在NaCl和甘露醇處理條件下的子葉變綠速率及主根根長,發(fā)現(xiàn)脅迫條件下過表達株系的子葉變綠速度比野生型快,主根比野生型長；而突變體則相反。(5)分別觀察統(tǒng)計過表達株系、缺失突變體株系以及野生型在干旱處理前后植株的成活情況、不同濃度ABA處理時的氣孔開度及葉片的失水率,發(fā)現(xiàn)與野生型相比,過表達株系的抗干旱能力增強,ABA處理時氣孔閉合速度快,且在相同處理時間失水率比野生型低：而缺失突變體則相反。定量分析鹽處理后過表達株系、缺失突變體株系以及野生型中滲透脅迫響應關(guān)鍵基因RD29A、RD29B的表達,發(fā)現(xiàn)過表達株系中RD29A、RD29B的表達量比野生型中高,缺失突變體則相反,表明AtMYB32在擬南芥抗?jié)B透脅迫過程中起正向調(diào)節(jié)作用。
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2
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本文編號：1216804