發(fā)布時(shí)間：2017-11-22 04:03

  本文關(guān)鍵詞：睡美人轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)AEG1基因修飾的樹突狀細(xì)胞可治療小鼠肝癌

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【摘要】：目的 :探討睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重組轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)轉(zhuǎn)染DCs對小鼠肝癌的抑制作用。方法 :從p EGFP-N1質(zhì)粒中獲取巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV)啟動(dòng)子和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fl uorescent protein,EGFP)基因,從小鼠肝癌細(xì)胞H22中克隆AEG1基因,將上述基因分別插入質(zhì)粒p T/HB后獲得重組轉(zhuǎn)座子載體p T-CMV-EGFP和p T-CMV-AEG1。將重組轉(zhuǎn)座子載體分別與轉(zhuǎn)座酶p CMV-SB11按一定比例混合后獲得雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)p T-CMV-EGFP/SB11和p T-CMV-AEG1/SB11。將p T-CMVEGFP/SB11轉(zhuǎn)染DCs,熒光顯微鏡和FCM法觀察EGFP表達(dá)率;將p T-CMV-AEG1/SB11轉(zhuǎn)染DCs后,RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測AEG1 m RNA和蛋白的表達(dá)。用p T-CMV-AEG1/SB11轉(zhuǎn)染后的DCs治療肝癌H22細(xì)胞荷瘤小鼠,觀察小鼠體內(nèi)腫瘤體積的變化,并采用乳酸脫氫酶釋放法檢測治療19 d后小鼠脾細(xì)胞對肝癌H22細(xì)胞的殺傷活性。結(jié)果 :經(jīng)質(zhì)粒酶切和基因測序證實(shí),重組轉(zhuǎn)座子載體p T-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均構(gòu)建成功。pT-CMV-EGFP/SB11轉(zhuǎn)染DCs后24和48 h,細(xì)胞內(nèi)EGFP的表達(dá)率分別為46.5%和27.8%,均明顯高于空載體p TCMV/SB11轉(zhuǎn)染組(P值均0.001)。p T-CMV-AEG1/SB11轉(zhuǎn)染DCs后24 h,細(xì)胞內(nèi)AEG1 m RNA和蛋白表達(dá)水平均高于空載體p T-CMV/SB11轉(zhuǎn)染組(P值均0.001)。用p T-CMV-AEG1/SB11轉(zhuǎn)染的DCs治療H22荷瘤小鼠后,小鼠體內(nèi)腫瘤生長被明顯抑制(P0.01),小鼠脾細(xì)胞對肝癌H22細(xì)胞的殺傷活性明顯增強(qiáng)(P0.01)。結(jié)論:SB轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)可高效轉(zhuǎn)染DCs。p T-CMV-AEG1/SB11轉(zhuǎn)染的DCs可通過誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫,抑制H22細(xì)胞荷瘤小鼠的腫瘤生長。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)附屬甘美醫(yī)院(昆明市第一人民醫(yī)院)生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究-昆醫(yī)聯(lián)合專項(xiàng)(編號:2013FZ290)~~
【分類號】：R735.7
【正文快照】：

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本文編號：1213376