本文關(guān)鍵詞：小鼠MSTN shRNA可控表達(dá)載體構(gòu)建及基因沉默效率研究

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【摘要】：肌肉生成抑制素(MSTN)是肌肉發(fā)育的負(fù)調(diào)控因子。根據(jù)MSTN mRNA序列設(shè)計1對MSTN shRNA并構(gòu)建整合型四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)MSTN shRNA載體pSingle-tTS-MSTN shRNA-GFP。重組載體轉(zhuǎn)染小鼠成肌細(xì)胞并經(jīng)G418篩選,通過強力霉素(DOX)誘導(dǎo)細(xì)胞中MSTN shRNA表達(dá),利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞中GFP表達(dá)情況,利用實時熒光定量PCR(QRT-PCR)及Western blot檢測MSTN mRNA及蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明:經(jīng)DOX誘導(dǎo)后,轉(zhuǎn)染含MSTN shRNA重組載體細(xì)胞組MSTN mRNA相對表達(dá)水平比未經(jīng)DOX誘導(dǎo)組及其他對照組細(xì)胞中降低70%左右,差異極顯著(P0.01),MSTN蛋白也下降90%左右,其他各組間MSTN mRNA及蛋白表達(dá)量差異不顯著(P0.05)。該研究成功構(gòu)建了可控表達(dá)MSTN shRNA載體,并在細(xì)胞水平證明其有很好的基因表達(dá)及調(diào)控效率,為后續(xù)制備可控表達(dá)MSTN shRNA轉(zhuǎn)基因小鼠,通過精細(xì)調(diào)控MSTN基因的表達(dá)為研究該基因在肌肉發(fā)育中的功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31101683、31272405) 江蘇高校品牌專業(yè)建設(shè)工程項目(PPZY2015B158) 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心項目(2016-10)
【分類號】：Q786
【正文快照】： 基因表達(dá)調(diào)控是研究基因功能的重要手段。目的基因能否在表達(dá)系統(tǒng)中高效、可控表達(dá)是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵。研究者在基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制探究中,研發(fā)出一系列基因表達(dá)可控系統(tǒng)。其中,四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)是近年來應(yīng)用最廣泛的一個可控表達(dá)系統(tǒng)[1],利用該系統(tǒng)成功制備出轉(zhuǎn)基因小鼠、

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1199742