本文關(guān)鍵詞：光皮樺實(shí)時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選

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【摘要】：【目的】利用定量PCR和表達(dá)分析軟件研究候選內(nèi)參基因在光皮樺不同組織中的表達(dá)穩(wěn)定性,并通過目的基因的表達(dá)分析驗(yàn)證其可靠性,以獲得可用于光皮樺定量PCR的穩(wěn)定內(nèi)參基因�！痉椒ā窟x取16個常用的看家基因作為候選內(nèi)參基因,設(shè)計引物,通過普通PCR、溶解曲線及瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證引物的特異性;通過實(shí)時熒光定量PCR及軟件ge Norm、Norm Finder和Best Keeper分析候選內(nèi)參基因在光皮樺16個不同組織中的表達(dá)穩(wěn)定性,根據(jù)分析結(jié)果篩選出最佳的內(nèi)參基因和組合,并進(jìn)一步通過2個目的基因CSLD和KOR對內(nèi)參基因的穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】PCR和電泳結(jié)果顯示,候選內(nèi)參基因PCR目的片段條帶清晰單一,熔解曲線也呈現(xiàn)明顯的單一峰,表明這些引物的特異性良好。利用特異引物,對這些候選基因在16個不同組織的表達(dá)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)除了18S,其他基因的Ct值均集中在25~30之間,表明內(nèi)參基因在不同組織中表達(dá)較穩(wěn)定,它們之間的表達(dá)水平差異不明顯。Norm Finder和Best Keeper分析結(jié)果均表明基因EF1α的穩(wěn)定性最好,ge Norm計算得出最穩(wěn)定的是TATA,而UBi-lp在所有候選內(nèi)參基因中表達(dá)最不穩(wěn)定。進(jìn)一步選取3個穩(wěn)定表達(dá)候選基因(EF1α,TATA和UBi4)及穩(wěn)定性較差的UBi-lp作為內(nèi)參基因,對2個目的基因CSLD和KOR在不同組織中的相對表達(dá)進(jìn)行分析,結(jié)果表明這2個目的基因相對于3個穩(wěn)定的內(nèi)參基因顯示出一致的相對表達(dá)量,而不穩(wěn)定的內(nèi)參基因UBi-lp并沒有對表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)化,結(jié)果存在明顯偏差�！窘Y(jié)論】通過實(shí)時熒光定量PCR及綜合3種軟件分析的結(jié)果,在光皮樺不同的組織中,EF1α,TATA和UBi4內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性高,對這3個基因進(jìn)行驗(yàn)證并明確其作為熒光實(shí)時定量PCR內(nèi)參的可靠性。因此,EF1α,TATA和UBi4可作為研究基因在光皮樺不同組織器官中表達(dá)的穩(wěn)定內(nèi)參。
【作者單位】： 浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31100494) 浙江省竹木農(nóng)業(yè)新品種選育重大科技專項(2012C12908-8)
【分類號】：S792.15
【正文快照】： 實(shí)時熒光定量PCR是在普通PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù),因其定量準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)、靈敏度高及高通量的優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析(Nolan et al.,2006;Schmid et al.,2003;Wong et al.,2005)。然而,由于受到RNA提取質(zhì)量、逆轉(zhuǎn)錄效率等因素的影響,目的基因表達(dá)結(jié)果的

【相似文獻(xiàn)】

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