本文關(guān)鍵詞：多年生黑麥草LpGCS基因克隆及其在煙草中的初步功能驗(yàn)證

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【摘要】：本研究以多年生黑麥草‘高帽2號(hào)’葉片為試材,根據(jù)同源基因的CDS序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,采用RT-PCR和RACE技術(shù),克隆了多年生黑麥草γ-谷氨�；腚装彼岷铣擅富騆pGCS。該基因全長(zhǎng)為1674bp(GenBank登錄號(hào):KJ551844),具有完整的開(kāi)放閱讀框(ORF),共1125bp;對(duì)其氨基酸序列特性、結(jié)構(gòu)以及與其他8種同源基因氨基酸序列間的同源性進(jìn)行了研究,預(yù)測(cè)該蛋白分子量為42.86kDa,屬于不穩(wěn)定類蛋白質(zhì),其蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主;蛋白質(zhì)氨基酸序列與其他8種同源基因氨基酸序列間同源性都比較高;此外,成功構(gòu)建了該基因的正、反義植物表達(dá)載體pCAMBIA-Ubi-LpGCS+和pCAMBIA-Ubi-LpGCS-,并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)正、反義基因煙草。對(duì)轉(zhuǎn)基因植株和野生型煙草進(jìn)行鎘離子脅迫試驗(yàn),生理生化指標(biāo)測(cè)試結(jié)果表明鎘離子脅迫處理10d后,轉(zhuǎn)LpGCS+植株中MDA含量低于野生型,光合色素含量與POD、SOD、CAT活性均高于野生型;而轉(zhuǎn)LpGCS-植株中MDA含量高于野生型,光合色素含量與POD、SOD、CAT活性均低于野生型。綜上所述,LpGCS基因在煙草中的過(guò)量表達(dá)可以提高植株的耐鎘脅迫能力,為進(jìn)一步利用該基因轉(zhuǎn)化多年生黑麥草培育抗重金屬植株奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所國(guó)家林業(yè)局林木培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家863項(xiàng)目(2011AA10020902)資助
【分類號(hào)】：S543.6;Q943.2
【正文快照】： 在植物抗氧化系統(tǒng)中,谷胱甘肽(glutathione,GSH)是植物應(yīng)對(duì)活性氧引起的氧化破壞中最為重要的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì),其在硫的運(yùn)輸調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝物質(zhì)的結(jié)合、外源化學(xué)物質(zhì)的解毒[1]和一些植物懸浮培養(yǎng)細(xì)胞和葉片中脅迫響應(yīng)基因(例如,PR1,GST,GPX,CHS,PAL,SOD等)的表達(dá)中起到了重要

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 崔延棠,尉亞輝,慕東;激光輻照多年生黑麥草種子的生物學(xué)效應(yīng)初探[J];西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年05期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王慧忠;匍匐翦股穎和多年生黑麥草對(duì)鎘、鉛脅迫的響應(yīng)及部分基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：1189527