發(fā)布時(shí)間：2017-11-15 06:14

  本文關(guān)鍵詞：斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H基因克隆及其表達(dá)

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【摘要】：【目的】克隆斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)泛素結(jié)合酶E2 H基因(UBE2H),了解其組織特異性表達(dá)情況,為揭示UBE2H在斑節(jié)對(duì)蝦卵巢發(fā)育過(guò)程的作用提供依據(jù)�！痉椒ā縋CR擴(kuò)增斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H基因的開(kāi)放閱讀框,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)UBE2H基因在斑節(jié)對(duì)蝦各組織及不同發(fā)育期斑節(jié)對(duì)蝦肝胰腺和卵巢中的表達(dá)情況;并構(gòu)建p ET32a-UBE2H原核表達(dá)重組質(zhì)粒,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)及蛋白純化。【結(jié)果】克隆獲得的斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H基因全長(zhǎng)1010 bp(Gen Bank登錄號(hào)KU870456),其中,5'非編碼區(qū)77 bp,3'非編碼區(qū)378 bp,開(kāi)放閱讀框555 bp(編碼184個(gè)氨基酸)。斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H蛋白等電點(diǎn)(p I)4.88,分子量20.85 k D。斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H氨基酸序列與其他物種相似度很高,為78.00%~83.00%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,UBE2H基因在斑節(jié)對(duì)蝦淋巴組織中表達(dá)量最高,其次為鰓;在斑節(jié)對(duì)蝦不同卵巢發(fā)育期肝胰腺和卵巢中的表達(dá)量均呈先上升后下降的變化趨勢(shì),但其峰值出現(xiàn)時(shí)間存在差異,肝胰腺的最高表達(dá)量出現(xiàn)在卵巢III期,卵巢的最高表達(dá)量出現(xiàn)在卵巢II期。經(jīng)原核表達(dá)獲得的斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H融合蛋白約39.00 k D,純化后的蛋白濃度為2.92μg/μL�！窘Y(jié)論】斑節(jié)對(duì)蝦UBE2H參與了其卵母細(xì)胞發(fā)育和肝胰腺中卵黃蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,與斑節(jié)對(duì)蝦的卵巢發(fā)育密切相關(guān)。
【作者單位】： 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(CARS-47) 海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20163147) 廣東省海洋漁業(yè)科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目(A201501A06) 廣東省漁港建設(shè)和漁業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(A201601A08)
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4
【正文快照】： (1South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences/Key Lab of South China Sea FisheryResources ExploitationUtilization,Ministry of Agriculture,Guangzhou 510300,China;2College of Animal Science,South China Agricultural Uni

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