FU和MG132選擇性調(diào)控NKG2D配體表達及其機制初步研究
本文關(guān)鍵詞：rd29A啟動子的克隆及提高煙草抗逆性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院》 2010年
5-FU和MG132選擇性調(diào)控NKG2D配體表達及其機制初步研究
羅丹
【摘要】： NK細胞是天然免疫的主要承擔者,在腫瘤免疫、抗病毒感染及清除非己細胞中發(fā)揮重要作用【1-4】。與T細胞不同的是,NK細胞的細胞毒作用不受腫瘤細胞的MHC-Ⅰ類分子的限制,其細胞活性的發(fā)揮是其表達的各種受體分子與相應配體相互作用的結(jié)果。 NKG2D (NK group 2, member D)為NK細胞表面活化性受體,屬C型凝集素超家族成員。NKG2D可以廣泛地表達于多種免疫細胞【5,6】,如所有NK細胞表面以及部分NKT細胞、部分T細胞【7】。NKG2D的配體為MHC-I類相關(guān)分子(MHC class I-related molecules, MICs),包括MICA、MICB和ULBP1-5(病毒UL16結(jié)合蛋白)等【8】。MICA/B和ULBP1~3可被金屬蛋白酶作用而從細胞表面脫落【9】。MICs為“誘導型”細胞表面抗原【10,11】,近年的研究【12】發(fā)現(xiàn)許多因素,如細胞應激、熱休克、感染、DNA損傷和轉(zhuǎn)化等均可上調(diào)它們的表達,病毒miRNA、基質(zhì)金屬蛋白酶等可影響NKG2D配體的表達【13-17】。 研究表明,由于腫瘤細胞的MHC-I類分子丟失或變異,使得特異性MHC限制性的細胞毒T細胞不能發(fā)揮作用。在這種情況下,識別非MHC-I類分子的NKG2D在介導NK細胞識別和溶解腫瘤細胞的免疫反應中發(fā)揮關(guān)鍵的作用【18,19】。NKG2D通過與靶細胞表面誘導產(chǎn)生的相應配體結(jié)合,然后結(jié)合轉(zhuǎn)接蛋白向NK細胞傳遞活化信號,使NK細胞獲得攻擊靶細胞的能力【20】。另外還為CD8 + T細胞提供必要的協(xié)同刺激信號,因此在很大程度上NKG2D途徑的活化決定了機體的抗腫瘤細胞免疫水平。 文獻報道DNA損傷反應可以通過誘導NKG2D配體的上調(diào)來增加腫瘤細胞對NK細胞的敏感性【21-24】,因此激活DNA損傷反應的藥物/治療方法(如放療、化療)和NK細胞治療聯(lián)合應用,有可能減少藥物的副作用,提高腫瘤細胞對NK細胞殺傷的敏感性,提高抗腫瘤效果。 目前,化療聯(lián)合基于NK細胞的免疫治療在臨床上應用廣泛,但化療對NK細胞抗腫瘤活性的調(diào)節(jié)機制,尤其是對NKG2D介導的殺傷機制是如何調(diào)節(jié)的還不甚清楚。為什么同一個NKG2D受體在細胞上存在多種不同的配體?它們的作用有何差異?表達調(diào)控上有何不同?不同的化療藥物所造成的損傷不同,其調(diào)控NKG2D配體表達的通路差異是什么?雖然NKG2D配體編碼區(qū)有一定保守性,但其5’非翻譯區(qū)同源性很低,提示不同刺激或病變對不同的NKG2D配體的表達調(diào)控可能是特異的。 因此,本研究以肺腺癌A549細胞系為模型,研究不同作用機制的抗代謝抗腫瘤藥5-FU和蛋白酶體抑制劑MG132對A549細胞的NKG2D配體表達及對NK細胞殺傷敏感性的影響,并探討其可能的調(diào)控機制。 目的:研究5-FU和MG132對A549細胞NKG2D配體表達的調(diào)控及其機制。 方法:采用PCR方法,以A549細胞的全基因組為模板,擴增人NKG2D配體MICA/B的啟動子及其5個截短體基因,并亞克隆入pGL3-Basic報告基因載體,轉(zhuǎn)染A549細胞后運用雙熒光報告基因系統(tǒng)進行啟動子活性分析。用MTT法檢測了不同濃度5-FU和MG132對A549細胞的抑制率;測定了300μM 5-FU、10μM MG132處理對MICA/B啟動子活性的影響。采用熒光定量PCR和流式細胞術(shù)檢測5-FU和MG132對NKG2D配體在mRNA、細胞表面蛋白水平上的表達變化;用彗星法觀察5-FU和MG132處理A549后DNA的損傷情況;Western blot檢測DNA損傷反應通路中信號分子Chk1、Chk2蛋白磷酸化;并觀察了DNA損傷反應通路分子抑制劑對5-FU和MG132誘導NKG2D配體表達作用的影響。 結(jié)果:克隆了人MICA、MICB的啟動子及其五個截短體基因并測定了啟動子基礎(chǔ)活性。5-FU可分別上調(diào)MICA/B啟動子相對活性1.48和1.87倍, MG132可上調(diào)MICB啟動子相對活性1.77倍。5-FU可提高MICB和ULBP2在mRNA水平的表達,分別是對照的1.76和3.28倍,而在細胞表面蛋白水平MICB蛋白表達水平?jīng)]變化,ULBP2表達提高了16.05%;MG132可提高MICB、ULBP1、ULBP3在mRNA水平的表達,分別是對照的10.62、11.09和7.25倍,而細胞表面蛋白只有MICB、ULBP1表達分別提高了68.18%、23.65%。NK殺傷實驗發(fā)現(xiàn)5-FU和MG132可提高NK細胞對A549細胞的殺傷率,NK對A549的殺傷作用可部分被NKG2D抗體、ULBP2抗體、MICB和ULBP1抗體抑制。5-FU和MG132處理可使A549細胞DNA發(fā)生損傷,彗星法(堿性裂解法)可觀察到明顯的拖尾現(xiàn)象,而且5-FU和MG132可分別使Chk1、Chk2發(fā)生磷酸化。使用ATM激酶抑制劑KU55933、Chk1抑制劑SB218078和PI3激酶抑制劑Wortmannin均可抑制5-FU和MG132引起的細胞表面ULBP2和MICB的表達上調(diào)。 結(jié)論:以上結(jié)果表明5-FU和MG132分別選擇性上調(diào)了A549細胞表面ULBP2和MICB的表達,并增強了A549細胞對NKG2D及其相應配體介導的NK殺傷敏感性。5-FU對ULBP2表達的調(diào)節(jié)可能與DNA損傷反應通路中Chk1的磷酸化水平上升有關(guān),MG132對MICB表達的調(diào)節(jié)可能與Chk2的磷酸化水平增加有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R730.3
【目錄】：
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【參考文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 張建;徐永健;熊維寧;張珍祥;杜春玲;喬禮芬;倪望;陳士新;;轉(zhuǎn)染IκBα基因抑制NF-κB活性對A549細胞侵襲行為的影響[J];癌癥;2008年07期
2 單佑安;劉慶;董蕻;顧瑋;蔣建新;;MD-2基因啟動子區(qū)-1064、-1625 SNP對啟動子活性的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2007年03期
3 楊聚榮;何婭妮;張劍凱;李新倫;梁海君;林靜;吳小瑋;王惠明;李開龍;;人NaDC1基因啟動子序列轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的初步分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2007年18期
4 李新玲;楊傳平;曲敏;徐香玲;;rd29A啟動子的克隆及提高煙草抗逆性的研究[J];分子植物育種;2007年01期
5 廖品琥;黃冰;;白細胞介素-1β激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB介導A549細胞分泌白細胞介素-8的研究[J];臨床麻醉學雜志;2007年01期
6 張素萍;徐乃玉;童建;;順鉑作用HeLa細胞的蛋白質(zhì)組學研究[J];中華腫瘤防治雜志;2008年03期
7 劉華英;羅曉敏;李夏雨;牛朝霞;張荔茗;周鳴;彭聰;向波;李征;彭淑平;李丹;李小玲;李桂源;;過表達E2F6基因抑制BRD7基因啟動子活性[J];中國生物化學與分子生物學報;2006年11期
8 卜友泉;宋方洲;易發(fā)平;馬永平;;人NFBD1啟動子的鑒定與初步分析[J];中國生物化學與分子生物學報;2007年08期
9 張健;陳蘇寧;于江天;蘇金;藥立波;劉新平;;人NDRG2啟動子的克隆與活性鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2007年01期
10 朱自路,程志祥,熊俊,陳丙鶯;重組腺病毒ΔN IκBα的構(gòu)建及其對A549細胞中NF-κB活性的抑制[J];細胞與分子免疫學雜志;2005年02期
【共引文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 陳哲;孔祥翔;張斐斐;龔明;;植物抗逆性基因工程研究進展[J];安徽農(nóng)學通報(上半月刊);2009年07期
2 賈艾敏;李立芹;程淑芬;李秋;;煙草轉(zhuǎn)基因工作的研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年11期
3 郭弘光;吳繁花;;MYB轉(zhuǎn)錄因子功能與調(diào)控研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2012年20期
4 王琨;崔滿華;何凱;;抗氧化劑PDTC對酸性環(huán)境誘導的人卵巢癌SKOV3細胞IL-8表達的作用及機制[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2007年04期
5 李娜;李莉;陳光輝;;作物抗旱機理及其相關(guān)基因的研究進展[J];長江大學學報(自然科學版);2011年03期
6 柏錫;翟紅;朱延明;;擬南芥MYBC1轉(zhuǎn)錄因子介導ABA調(diào)節(jié)的種子萌發(fā)[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2011年07期
7 盧芳;徐祥;梁華平;楊雪;范霞;魏強;王希;鮑依稀;;HP-10對結(jié)腸癌LoVo細胞體內(nèi)外增殖的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年07期
8 朱江;蘭歡;洪蘇玲;卜友泉;;人NFBD1啟動子區(qū)域順式作用元件CHR的定點突變分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年10期
9 吉穎;劉竹;艾青;朱江;謝濛宇;翁華莉;劉革力;宋方洲;卜友泉;;人HAS3基因核心啟動子區(qū)域的初步鑒定與分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2012年05期
10 錢孟佼;黃云超;;云南宣威肺癌與納米級石英氧化損傷核因子NF-κB高表達的關(guān)系[J];中國肺癌雜志;2009年11期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條
1 肖海華;方美玉;王昌全;陳強;辜運富;;小金海棠MxMYB2基因的克隆、序列與表達分析[A];面向未來的土壤科學（中冊）——中國土壤學會第十二次全國會員代表大會暨第九屆海峽兩岸土壤肥料學術(shù)交流研討會論文集[C];2012年
2 梁建國;菅琳;張啟翔;;Cre/loxP位點特異重組系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因菊花中的應用[A];中國觀賞園藝研究進展2012[C];2012年
3 楊帆;王麗;洪斌;;HDAC抑制劑調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Sp1機制研究進展[A];2013年中國藥學大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年
中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 李望豐;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表達及其耐鹽性研究[D];東北師范大學;2010年
2 牛姍姍;MYB對楊梅果實花青素苷合成的調(diào)控及其機制[D];浙江大學;2011年
3 李曉薇;大豆兩個MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及其功能分析[D];吉林大學;2011年
4 孫健;中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析及原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學特點的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年
5 余發(fā)新;雜種馬褂木生根性狀遺傳變異及相關(guān)基因篩選[D];南京林業(yè)大學;2011年
6 胡亮杉;植物多酚提高CD34~+早期急性髓系白血病細胞被活化免疫細胞殺傷的敏感性[D];南方醫(yī)科大學;2011年
7 吳龍妍;人類NK細胞新功能基因HMBOX1的發(fā)現(xiàn)及其對NK細胞功能的調(diào)節(jié)[D];山東大學;2010年
8 羅紅麗;水稻抗病性相關(guān)homeodomain型轉(zhuǎn)錄因子基因OsBIHD1的克隆鑒定與功能分析[D];浙江大學;2004年
9 陳榮敏;普通小麥Myb和Dof轉(zhuǎn)錄因子家族基因的克隆和表達研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2004年
10 陳建民;水稻高稈隱性突變的遺傳和轉(zhuǎn)錄因子RdreB1基因克隆及功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2005年
中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 魏禮玲;MYB轉(zhuǎn)錄因子家族相關(guān)EST干涉載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年
2 宋雅男;葡萄VvERF3b基因和VvPDF1.2基因的啟動子功能分析[D];遼寧師范大學;2010年
3 賈翠玲;葡萄WRKY基因超家族的進化分析[D];遼寧師范大學;2010年
4 陳湘瑜;花生組織特異表達抗黃曲霉相關(guān)基因的載體構(gòu)建[D];福建農(nóng)林大學;2010年
5 李劍峰;小麥葉片水分脅迫下cDNA-AFLP差異表達分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2010年
6 王晨晨;擬人參皂苷F_(11)的結(jié)構(gòu)修飾研究[D];吉林大學;2011年
7 吳炎鵬;丙戊酸鈉對人胰腺癌PANC_1細胞增殖和凋亡的影響[D];暨南大學;2011年
8 常李偉;胡楊PeWRKY1基因及其啟動子的克隆與功能分析[D];北京林業(yè)大學;2011年
9 范紅燕;單核細胞及成纖維細胞和肺癌H460細胞混合培養(yǎng)條件下對MT1-MMP表達的影響及NS398的干預研究[D];蘭州大學;2011年
10 楊娜;肺間質(zhì)細胞促進H460細胞轉(zhuǎn)移機制的實驗研究[D];蘭州大學;2011年
【二級參考文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 余鷹,朱詩國,張必成,李忠花,向娟娟,周鳴,李小玲,李桂源;BRD7基因轉(zhuǎn)染對鼻咽癌細胞生長的抑制作用[J];癌癥;2001年06期
2 陳文艷;熊建萍;;腫瘤缺氧及其靶向治療研究進展[J];國際腫瘤學雜志;2006年01期
3 余鷹,朱詩國,張必成,周鳴,李小玲,李桂源;應用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選BRD7相互作用的蛋白質(zhì)[J];中國科學(C輯:生命科學);2002年02期
4 李征宇,趙霞,楊金亮,魏于全;順鉑作用卵巢癌細胞株的蛋白質(zhì)組學研究[J];中國科學C輯:生命科學;2005年03期
5 朱自路,王若寧,沈琦,李崇勇,孫愛民,陳丙鶯;IκB-α基因的克隆及其真核表達載體的構(gòu)建[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2002年02期
6 余鷹謝,奕曹利,張必成,周鳴,李桂源,public.cs.hn.cn;一個新鼻咽癌抑瘤候選基因的克隆及其功能初步分析[J];生物化學與生物物理進展;2000年03期
7 鄧艷春,藥立波,劉新平,聶曉燕,王吉村,張曉光,蘇成芝;人腦內(nèi)一含有ACP樣結(jié)構(gòu)域新基因的發(fā)現(xiàn)[J];生物化學與生物物理進展;2001年01期
8 楊清武,朱佩芳,王正國,蔣建新;Toll樣受體4介導內(nèi)毒素對內(nèi)皮細胞NF-κB的激活[J];生物化學與生物物理進展;2002年03期
9 余鷹,張必成,謝奕,曹利,周鳴,朱詩國,湛鳳凰,李桂源;兩個鼻咽癌負相關(guān)新基因的分離與特性[J];中國生物化學與分子生物學報;2000年05期
10 卜友泉,羅緒剛,李素芬,魯成,李英文,鄺霞,劉彬,李建凡,余順祥;雞含錳超氧化物歧化酶cDNA克隆及序列分析[J];中國生物化學與分子生物學報;2001年04期
中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 吳健敏;中國特有小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的檢測與全基因克隆[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年
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1 傅寶玉 ,黃玉瑋;胃底、胃體、胃竇部潰瘍病人胃竇部MMCⅢ期的累積動力指數(shù)的測定及意義[J];遼寧醫(yī)學雜志;2002年04期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 畢宏生;吳建峰;盧秀珍;解孝鋒;王興榮;宋繼科;;漢防己甲素聯(lián)合5-FU殼聚糖微球防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實驗研究[A];第十屆全國中西醫(yī)結(jié)合眼科學術(shù)會議暨第五屆海峽眼科學術(shù)交流會論文匯編[C];2011年
2 嚴愛婷;錢曉萍;劉寶瑞;;食管癌5-Fu相關(guān)分子標記的研究進展[A];2010’全國腫瘤分子標志及應用學術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年
3 吳蘇光;;艾力聯(lián)合5-FU治療晚期大腸癌患者的護理[A];中華護理學會全國腫瘤護理學術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年
4 劉曉華;邵禮錚;林志宏;;抗癌中藥復合5-Fu磁性微球制劑的研制[A];中國自然資源學會天然藥物資源專業(yè)委員會成立大會暨第一次學術(shù)研討會會刊[C];1994年
5 葉麗卡;謝志紅;陳瑞卿;;高效液相色譜法測定人血漿中5-FU的濃度[A];共鑄醫(yī)藥學術(shù)新文明——2012年廣東省藥師周大會論文集[C];2012年
6 賈筱君;王振運;賀云霞;;5—Fu治療前列增生癥72例臨床報告[A];第五屆中國中西醫(yī)結(jié)合圍手術(shù)期醫(yī)學研討會論文集[C];2010年
7 周志剛;王振豫;王軍委;;放射與5-Fu粒子聯(lián)合植入治療胰腺癌[A];中國(第七屆)腫瘤微創(chuàng)治療學術(shù)大會暨世界影像導引下腫瘤微創(chuàng)治療學會成立籌備大會論文匯編[C];2011年
8 楊慧;宋于剛;;沉默PI3K p85α表達對大腸癌細胞5-FU敏感性的影響及其的相關(guān)機制的研究[A];第二十二屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學術(shù)會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2010年
9 張振;沃雁;章一新;毛小慧;錢云良;王丹茹;賀蓉;崔大祥;;納米級5-FU變形脂質(zhì)體的體外透瘢痕實驗[A];第七屆中國醫(yī)師協(xié)會美容與整形醫(yī)師大會論文集[C];2010年
10 李崇佼;蘭曉莉;張永學;;應用~(18)F-FDG評價結(jié)腸癌對FU治療后早期反應的基礎(chǔ)研究[A];中華醫(yī)學會第九次全國核醫(yī)學學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年
中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條
1 王娟霞;有機硅季銨鹽聯(lián)合5-FU對肝癌細胞增殖及凋亡的影響[D];蘭州大學;2013年
2 胡斌;Id-1 siRNA增強大腸癌SW480細胞對5-FU的化療敏感性[D];中南大學;2010年
3 楊宇;胰腺癌5-氟尿嘧啶（5-FU）耐藥相關(guān)蛋白篩查及胰腺癌候選免疫原性膜抗原SLP-2和Prohibitin分子生物學功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年
4 馬克龍;DNA甲基化調(diào)控的microRNA所介導的腫瘤化療敏感性：肝癌5-FU化療敏感性之范例[D];復旦大學;2011年
5 林桂渺;Egr-hTERTC27聯(lián)合5-FU治療鼻咽癌及TCF3抑制小鼠胚胎癌生長的實驗研究[D];吉林大學;2012年
6 張為家;TGFβ2經(jīng)Snail介導的上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在乳腺癌5-FU耐藥中的作用及機制[D];中南大學;2012年
7 楊景文;5-Fu誘導人結(jié)腸癌HCT-116細胞自噬與凋亡的關(guān)系及機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年
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1 張士璽;針撥聯(lián)合5-FU結(jié)膜下注射治療失敗濾過泡的臨床研究[D];山東大學;2011年
2 武雙雙;雷替曲塞聯(lián)合5-FU用于治療結(jié)腸癌的體外研究[D];吉林大學;2012年
3 賀偉;5-FU對人體膽管瘢痕成纖維細胞作用的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2012年
4 林海;微波消融聯(lián)合5-FU對小鼠結(jié)腸癌移植瘤治療的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學;2011年
5 楊占彪;FU公司技術(shù)創(chuàng)新管理的研究[D];西北大學;2012年
6 曾思敏;多不飽和脂肪酸及其聯(lián)合5-FU影響胃癌細胞生長的細胞生物學研究[D];浙江大學;2014年
7 張苗苗;多西他賽聯(lián)合奧沙利鉑、5-Fu方案治療晚期胃癌的療效分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年
8 王建才;結(jié)直腸癌術(shù)中腹腔植入5-FU緩釋劑的臨床研究[D];中南大學;2013年
9 續(xù)婷婷;瘤內(nèi)注射貝伐單抗聯(lián)合5-FU治療結(jié)直腸癌實驗的相關(guān)探討[D];中南大學;2013年
10 徐秀利;5-FU聯(lián)合雷公藤甲素治療胰腺癌作用的體外實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2011年
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