發(fā)布時間：2017-11-08 12:02

  本文關鍵詞：枇杷果實木質化相關基因的克隆及功能分析

  更多相關文章： 枇杷 果實木質化 PAL C4H 4CL EjLIM

【摘要】：枇杷(Eriobotrya japonica)是我國特色水果。紅肉枇杷采后易發(fā)生果實木質化現(xiàn)象,嚴重影響果實食用品質。本論文以紅肉枇杷‘洛陽青’果實為試材,以木質素單體合成途徑上游部分酶為目標,利用熱激(HT)、程序降溫(LTC)、1-甲基環(huán)丙烯(1-MCP)等處理,研究分析果實木質化相關的木質素含量,PAL, C4H和4CL酶活性及其編碼基因表達情況,鑒別了參與枇杷果實木質化相關基因的關鍵成員；同時克隆了枇杷EjLIM轉錄因子,并初步探究其參與枇杷果實木質化調控的機理。主要結果如下：1. HT、LTC和1-MCP處理對枇杷果實木質化的影響。測定了不同處理下‘洛陽青’枇杷果實木質素以及木質素單體合成途徑上游酶PAL、C4H和4CL的活性,結果表明這三種酶活性變化趨勢與果肉木質化進程相一致,顯示不同處理可通過影響木質素單體合成途徑中相關酶活性,進而影響木質素積累,調控果實木質化進程。2.枇杷果實PAL、C4H和4CL編碼基因分離及表達分析。在已報道的EjPAL1、 EjPAL2、Ej4CL1-5基礎上,利用RNA-seq和RACE技術分離到2個EkC4H和6個Ej4CL新成員,分別命名為EjC4H1-2和Ej4CL6-11。結合生理數(shù)據(jù)、進化樹分析和基因表達結果,初步確定EjPAL1、EjPAL2、Ej4CL1、Ej4CL6和Ej4CL8這5個基因與枇杷果實木質化呈正相關關系,而EjC4H1-2與木質化關系不明顯。進一步研究結果顯示,Ej4CL1對低溫響應最為強烈,HT、LTC均可顯著抑制冷害果實中的Ej4CL1表達；果實衰老進程中的Ej4CL1表達強度也可被1一MCP處理顯著抑制；Ej4CL1瞬時過量表達可顯著誘導煙草葉片中的木質素積累。3. EjLIM轉錄因子參與枇杷果實木質化調控分析。利用同源克隆得到EjLIM轉錄因子,雙熒光素酶試驗結果顯示它可激活擬南芥AtPAL1和At4CL1的啟動子活性,類似的,EjLIM也可增強枇杷EjPAL1和Ej4CL1基因的啟動子活性,但煙草葉片瞬時過量表達EjLIM并不能顯著影響煙草葉片中的木質素積累。EjLIM參與枇杷果實木質化的機理還有待于進一步研究。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S667.3

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