本文關(guān)鍵詞：稻縱卷葉螟海藻糖酶基因的克隆、分子特性和表達(dá)分析

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【摘要】：【目的】海藻糖酶(trehalase,Tre)是昆蟲(chóng)體內(nèi)海藻糖代謝的一個(gè)關(guān)鍵酶,包括可溶型(Tre1)和膜結(jié)合型(Tre2)兩種類(lèi)型,在昆蟲(chóng)發(fā)育和能量調(diào)節(jié)中具有重要作用。本研究旨在克隆稻縱卷葉螟Cnaphalocrocis medinalis海藻糖酶基因(Cm Tre),解析其在稻縱卷葉螟不同發(fā)育階段和不同組織中的表達(dá)模式,分析該基因及酶蛋白的分子特征�！痉椒ā客ㄟ^(guò)稻縱卷葉螟轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)結(jié)合RACE技術(shù),克隆稻縱卷葉螟Cm Tre的全長(zhǎng)c DNA序列,并對(duì)該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)解析Cm Tre在稻縱卷葉螟不同發(fā)育階段及成蟲(chóng)不同組織部位的m RNA表達(dá)模式�！窘Y(jié)果】獲得兩種類(lèi)型的稻縱卷葉螟Cm Tre基因,即可溶型海藻糖酶基因Cm Tre1和膜結(jié)合型海藻糖酶基因Cm Tre2。Cm Tre1的全長(zhǎng)c DNA長(zhǎng)度為2 364 bp,開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1 704 bp,編碼567個(gè)氨基酸;Cm Tre2的全長(zhǎng)c DNA長(zhǎng)度為2 079 bp,開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1 923 bp,編碼640個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明,Cm Tre前端有一個(gè)信號(hào)肽,Cm Tre1無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),Cm Tre2有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)。同源性和聚類(lèi)分析表明,Cm Tre1和Cm Tre2的氨基酸序列與竹蠹螟Omphisa fuscidentalis海藻糖酶Tre1和Tre2氨基酸序列的一致性最高,分別為74%和79%。同源建模預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,Cm Tre1的三維分子結(jié)構(gòu)包含19個(gè)α螺旋和2個(gè)β折疊片;Cm Tre2的三維分子結(jié)構(gòu)含有23個(gè)α螺旋,沒(méi)有β折疊片。RT-q PCR結(jié)果顯示,Cm Tre在稻縱卷葉螟整個(gè)發(fā)育歷期都有表達(dá),在成蟲(chóng)期表達(dá)水平最高,在整個(gè)幼蟲(chóng)期都有相對(duì)穩(wěn)定的表達(dá);Cm Tre1在蛹期表達(dá)水平最低,Cm Tre2在5齡幼蟲(chóng)時(shí)期表達(dá)水平最低。Cm Tre在所檢測(cè)的成蟲(chóng)組織(中腸、體壁、馬氏管、頭、卵巢、脂肪體、肌肉和精巢)中均有表達(dá);Cm Tre1在中腸和體壁中的表達(dá)水平較高,Cm Tre2在肌肉和中腸中的表達(dá)水平較高�！窘Y(jié)論】本研究克隆了稻縱卷葉螟兩種類(lèi)型的海藻糖酶基因,分析了其基因特征和表達(dá)模式。研究結(jié)果為闡明海藻糖酶基因的功能進(jìn)而以海藻糖酶基因?yàn)榘袠?biāo)防治害蟲(chóng)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 貴州大學(xué)昆蟲(chóng)研究所貴州山地農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360443) 貴州大學(xué)研究生創(chuàng)新基金(研農(nóng)2014009) 農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治貴州省研究生卓越人才計(jì)劃項(xiàng)目(黔教研合ZYRC2013010) 貴州省普通高等學(xué)校系統(tǒng)與應(yīng)用蜱螨學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(黔教合人才團(tuán)隊(duì)[2014]33)
【分類(lèi)號(hào)】：S435.112.1
【正文快照】：

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本文編號(hào)：1150412