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博士論文    

斜臥青霉β-葡萄糖苷酶的性質(zhì)和功能研究及基因表達(dá)譜分析

     論文目錄

摘要第1-11頁

ABSTRACT第11-16頁

符號說明及縮略詞第16-18頁

第一章 緒論第18-42頁

   ·β-葡萄糖苷酶第18-26頁

     ·β-葡萄糖苷酶的分類第19頁

     ·β-葡萄糖苷酶的結(jié)構(gòu)第19-20頁

     ·β-葡萄糖苷酶的催化機理第20-21頁

     ·β-葡萄糖苷酶的底物特異性第21-22頁

     ·β-葡萄糖苷酶的理化性質(zhì)第22-23頁

     ·β-葡萄糖苷酶在生物乙醇生產(chǎn)中的應(yīng)用第23-26頁

   ·絲狀真菌木質(zhì)纖維素酶的合成調(diào)控機制研究進(jìn)展第26-34頁

     ·碳源對纖維素酶的誘導(dǎo)作用第26-29頁

     ·β-葡萄糖苷酶在真菌纖維素酶合成調(diào)控中的作用第29-31頁

     ·木質(zhì)纖維素酶的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控第31-33頁

     ·其它因素對木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控的影響第33-34頁

   ·木質(zhì)纖維素降解酶合成調(diào)控機制的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究第34-40頁

     ·里氏木霉木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控機制的研究進(jìn)展第35-36頁

     ·粗糙脈孢菌木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控機制的研究進(jìn)展第36-38頁

     ·曲霉木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控機制的研究進(jìn)展第38-40頁

   ·本論文的立題依據(jù)和研究內(nèi)容第40-42頁

第二章 胞外主要β-葡萄糖苷酶BGL1的性質(zhì)及在木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控中的功能研究第42-71頁

 引言第42-43頁

   ·材料和方法第43-53頁

     ·菌株、培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法第43-44頁

     ·常用儲備液第44-45頁

     ·常用試劑與儀器第45頁

     ·基因組DNA與總RNA的提取第45-46頁

     ·β-葡萄糖苷酶基因bgl1的克隆第46頁

     ·胞外β-葡萄糖苷酶的聚丙烯葡聚糖凝膠層析第46頁

     ·β-葡萄糖苷酶酶活力的測定第46-47頁

     ·蛋白濃度的測定和SDS-PAGE分析第47頁

     ·溫度和pH對酶活力的影響第47頁

     ·pBGL1的反應(yīng)動力學(xué)分析第47-48頁

     ·β-葡萄糖苷酶的添加對里氏木霉QM9414酶液糖化能力的影響第48頁

     ·胞外主要β-葡萄糖苷酶BGL1缺失菌株Δbgl1的構(gòu)建第48-50頁

     ·敲除株的驗證第50-51頁

     ·Δbgl1的表型分析第51頁

     ·胞外木質(zhì)纖維素酶活力測定第51頁

     ·纖維糊精的制備第51-52頁

     ·Δbgl1中木質(zhì)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平的測定第52-53頁

     ·胞內(nèi)纖維寡糖含量的測定第53頁

   ·結(jié)果與討論第53-69頁

     ·斜臥青霉114-2 BGL1的氨基酸序列分析第53-54頁

     ·斜臥青霉114-2 BGL1的分離純化第54-56頁

     ·pBGL1的酶學(xué)性質(zhì)第56-58頁

     ·β-葡萄糖苷酶的添加對里氏木霉QM9414發(fā)酵液糖化能力的影響第58-61頁

     ·BGL1在斜臥青霉114-2中的敲除第61-62頁

     ·Δbgl1的表型分析第62-63頁

     ·BGL1的缺失對胞外蛋白分泌及木質(zhì)纖維素酶活力的影響第63-65頁

     ·BGL1的缺失對木質(zhì)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響第65-69頁

 小結(jié)第69-71頁

第三章 胞內(nèi)主要β-葡萄糖苷酶BGL2的性質(zhì)及在木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控中的功能研究第71-103頁

 引言第71-72頁

   ·材料和方法第72-80頁

     ·菌株和培養(yǎng)基第72頁

     ·常用的儲備液以及緩沖液第72頁

     ·胞內(nèi)β-葡萄糖苷酶基因缺失菌株的構(gòu)建第72-75頁

     ·bgl2的原位回補第75-76頁

     ·蛋白濃度及木質(zhì)纖維素酶活力的測定第76頁

     ·Δbgl2纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平測定第76頁

     ·Δbgl2胞內(nèi)纖維二糖濃度的測定第76頁

     ·Δbgl1基因的克隆第76-77頁

     ·Δbgl2表達(dá)載體的構(gòu)建第77頁

     ·大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化第77-78頁

     ·重組蛋白在E.coli BL21中的異源表達(dá)第78-79頁

     ·重組蛋白的分離純化第79頁

     ·pH和溫度對重組蛋白酶活力的影響第79頁

     ·重組蛋白對纖維寡糖的水解作用第79-80頁

     ·重組BGL2的轉(zhuǎn)糖基作用檢測第80頁

   ·結(jié)果與討論第80-101頁

     ·斜臥青霉114-2胞內(nèi)的β-葡萄糖苷酶第80-81頁

     ·胞內(nèi)β-葡萄糖苷酶在斜臥青霉114-2中的敲除第81-83頁

     ·敲除株產(chǎn)纖維素酶能力的測定第83-85頁

     ·BGL2的缺失對胞外蛋白和木質(zhì)纖維素酶合成能力的影響第85-91頁

     ·BGL2的缺失對纖維素條件下木質(zhì)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄的影響第91-92頁

     ·纖維二糖濃度對敲除株木質(zhì)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響第92-94頁

     ·BGL2的氨基酸序列分析第94頁

     ·BGL2在E.coli BL21中的異源表達(dá)第94-96頁

     ·重組BGL2的分離純化第96-97頁

     ·重組BGL2的性質(zhì)分析第97-101頁

 小結(jié)第101-103頁

第四章 BGL1和BGL2雙缺菌株中木質(zhì)纖維素酶合成調(diào)控機制的研究第103-118頁

 引言第103-104頁

   ·方法和材料第104-106頁

     ·菌株、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件第104頁

     ·BGL1和BGL2雙敲除菌株Δbgl1Δbgl2的構(gòu)建第104-105頁

     ·Δbgl1Δbgl2的表型分析第105頁

     ·Δbgl1Δbgl2的產(chǎn)酶能力測定第105頁

     ·Δbgl1Δbgl2纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平測定第105頁

     ·Δbgl1Δbgl2胞內(nèi)纖維二糖濃度的測定第105-106頁

   ·結(jié)果與討論第106-116頁

     ·β-葡萄糖苷酶雙敲除菌株△bgl1Δbgl2的構(gòu)建第106-107頁

     ·Δbgl1Δbgl2的表型分析第107-109頁

     ·β-葡萄糖苷酶的缺失對木質(zhì)纖維素酶活力的影響第109-111頁

     ·β-葡萄糖苷酶的缺失對木質(zhì)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響第111-113頁

     ·纖維二糖代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平檢測第113-114頁

     ·不同二糖對斜臥青霉纖維素酶的誘導(dǎo)作用第114-115頁

     ·斜臥青霉β-葡萄糖苷酶影響纖維素酶調(diào)控模型預(yù)測第115-116頁

 小結(jié)第116-118頁

第五章 斜臥青霉114-2及高產(chǎn)突變株的基因表達(dá)譜差異分析第118-136頁

 引言第118-119頁

   ·材料與方法第119-121頁

     ·菌株、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件第119頁

     ·常用溶液和試劑第119-120頁

     ·RNA樣品的準(zhǔn)備及測序第120-121頁

     ·差異表達(dá)基因的篩選第121頁

     ·差異表達(dá)基因的分級聚類分析第121頁

     ·差異表達(dá)基因的GO功能富集分析第121頁

   ·結(jié)果與分析第121-134頁

     ·斜臥青霉野生菌株114-2在不同條件下的轉(zhuǎn)錄差異分析第121-126頁

     ·斜臥青霉突變株JU-A10-T在不同條件下的轉(zhuǎn)錄差異分析第126-130頁

     ·野生菌株114-2與突變株JU-A10-T的轉(zhuǎn)錄差異分析第130-134頁

 小結(jié)第134-136頁

論文創(chuàng)新性結(jié)果總結(jié)與展望第136-138頁

參考文獻(xiàn)第138-157頁

攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文第157-158頁

致謝第158-159頁

附錄第159-173頁

附件第173頁

論文編號BS1903216，這篇論文共173頁
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