發(fā)布時(shí)間：2017-10-31 03:16

  本文關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒S1基因的截段克隆表達(dá)及其在卵黃抗體制備上的應(yīng)用

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【摘要】：通過(guò)RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增了豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1截段基因序列,將擴(kuò)增的S1基因截段克隆到原核表達(dá)載體pET-32α(+)中,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32α-S1,經(jīng)測(cè)序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)中,并進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)果顯示:重組菌可表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量為45 000的融合蛋白,蛋白表達(dá)量較高;Western blotting結(jié)果顯示,表達(dá)的S1蛋白能與PEDV陽(yáng)性血清發(fā)生特異性的免疫反應(yīng),表明原核表達(dá)的S1蛋白具有良好的反應(yīng)原性;將純化后的S1蛋白與蜂膠佐劑按比例混合,作為免疫抗原,免疫產(chǎn)蛋雞,每隔2周免疫1次,共免疫3次,定期利用ELISA方法檢測(cè)抗體效價(jià)水平,瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)抗體效價(jià)最高達(dá)到1∶64,收集并純化卵黃抗體(IgY),SDS-PAGE結(jié)果分析純化效果較好;在人工感染仔豬試驗(yàn)中,卵黃抗體試驗(yàn)組的治愈率為100%,說(shuō)明卵黃抗體對(duì)豬流行性腹瀉病具有較好的治療效果。結(jié)果表明:表達(dá)的重組S1蛋白具有良好的抗原性,作為免疫抗原免疫產(chǎn)生的卵黃抗體具有較高的抗體效價(jià),為進(jìn)一步研制豬流性腹瀉卵黃抗體生物制劑奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué);山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 豬流行性腹瀉病毒 S基因 抗原性分析 卵黃抗體
【分類號(hào)】：S852.651
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:bzshenzq@163.com豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic di-arrhea virus,PEDV)引起的一種高度接觸性的消化道傳染病[1],主要引起嘔吐、水樣腹瀉、脫水以及仔豬的高病死率。PEDV屬于尼多病毒目(Ni

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本文編號(hào)：1120548