本文關(guān)鍵詞：冬凌草1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因克隆與表達分析

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【摘要】：1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase,DXS)是植物萜類代謝通路中2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸(MEP)途徑的第一個關(guān)鍵酶,在植物萜類物質(zhì)的生物合成中發(fā)揮重要的作用。為了研究該基因在冬凌草二萜類成分合成中的作用,該研究在冬凌草轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果的基礎(chǔ)上設(shè)計一對特異性引物,采用RT-PCR方法得到冬凌草Ir DXS基因c DNA全長序列,并對其蛋白進行理化性質(zhì)分析、信號肽預(yù)測、亞細胞定位預(yù)測、蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析及跨膜域分析等生物信息學(xué)分析,同時利用實時熒光定量PCR的方法檢測Ir DXS基因在冬凌草不同部位中的表達情況。結(jié)果表明:從冬凌草葉片中分離得到了一條編碼DXS的全長基因,通過生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn),該基因編碼全長2 169 bp,編碼722個氨基酸,分子量為77.7 k D。多序列比對發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白和其他植物中已知的DXS蛋白序列具有較高的同源性,N端均包含了一段質(zhì)體轉(zhuǎn)運肽序列,并均具有一個保守的焦磷酸硫胺素結(jié)構(gòu)域和與吡啶結(jié)合相關(guān)的DRAG結(jié)構(gòu)域。序列進化樹分析顯示,Ir DXS基因?qū)儆谥参顳XS2家族。DXS基因在冬凌草根中表達量最高、愈傷組織中最低。該研究首次獲得了Ir DXS基因的全長c DNA序列,并揭示了其在不同組織中的表達差異,為后續(xù)的深入研究Ir DXS基因在冬凌草二萜類成分合成途徑中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;河南中醫(yī)藥大學(xué)呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 冬凌草 DXS基因 生物信息學(xué)分析 熒光定量PCR 二萜
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81173486) 河南中醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新人才項目(2011XCXRC02) 河南省高等學(xué)校青年骨干教師計劃項目(2011GGJS-089)~~
【分類號】：Q943.2;S567
【正文快照】： 冬凌草(Isodon rubescens),是唇形科香茶菜屬植物碎米椏,主產(chǎn)于河南省太行山區(qū),其味甘苦、性微寒,具有清熱解表、消炎止痛、健胃活血及抗腫瘤等作用。冬凌草發(fā)揮抗腫瘤作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)主要是貝殼杉烯類二萜成分,迄今已分離得到190余種二萜類化合物(馮衛(wèi)生等,2008),其中代表

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5 張瑾峰;王U，

本文編號：1090167