本文關(guān)鍵詞：大口黑鱸GHRH基因啟動子區(qū)域序列分析及其活性檢測

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【摘要】：生長激素釋放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)是下丘腦弓狀核合成和分泌的小分子多肽,其主要功能是調(diào)節(jié)垂體細(xì)胞合成和釋放生長激素。為研究大口黑鱸(Micropterus salmoides)GHRH基因5’側(cè)翼啟動子區(qū)域的活性和該區(qū)域中潛在的轉(zhuǎn)錄因子對GHRH基因表達(dá)的調(diào)控作用,對該基因5’端啟動子區(qū)域約1400 bp長度的片段進(jìn)行序列分析,預(yù)測順式作用元件,獲得了Oct-1、SP1、NF-1、C/EBPalp和C/EBP等多個潛在的調(diào)控GHRH基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子結(jié)合位點(diǎn)序列。在包括外顯子1和內(nèi)含子1的GHRH基因5’側(cè)翼區(qū)兩側(cè)加入兩個限制性酶切位點(diǎn)Xho I和Bam H I,對其進(jìn)行改造,并將該片段插入紅色熒光蛋白報告基因載體p DsRed2-1,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pGHRH1-RFP。同時,用不含有外顯子1和內(nèi)含子1的GHRH基因5’側(cè)翼區(qū)構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p GHRH-RFP。將質(zhì)粒pGHRH1-RFP和p GHRH-RFP轉(zhuǎn)染鯉(Cyprinus carpio)上皮細(xì)胞(epithelioma papillosum cyprinid,EPC)。經(jīng)過48 h的培養(yǎng),在pGHRH1-RFP轉(zhuǎn)染的部分細(xì)胞中檢測到紅色熒光蛋白表達(dá)。又將pGHRH1-RFP或p GHRH-RFP質(zhì)粒注射到斑馬魚(Danio rerio)一細(xì)胞或二細(xì)胞期的胚胎中,注射了pGHRH1-RFP的胚胎在受精后48 h約有22.5%能檢測到有紅色熒光蛋白表達(dá),受精后72 h約有29%的仔魚檢測到紅色熒光蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,目前分離到的GHRH基因5’側(cè)翼序列具有啟動基因表達(dá)的活性,且該基因的內(nèi)含子1和外顯子1是啟動子的活性所必需的。另外,pGHRH1-RFP質(zhì)粒注射的斑馬魚胚胎只能在胚胎和仔魚的脊椎和肌肉中檢測到RFP的表達(dá),而在腦中沒有檢測到表達(dá)。推測擴(kuò)增到的大口黑鱸GHRH啟動子序列1407 bp(-1043 bp~362 bp)只是起到了驅(qū)動RFP脊椎和骨骼肌表達(dá)的作用,而不包括驅(qū)動在腦組織中特異性表達(dá)的啟動子,本研究為GHRH基因功能的深入分析奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶魚類選育與養(yǎng)殖重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 生長激素釋放激素 啟動子活性 大口黑鱸
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31001107) 948計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2011-G12) 廣東省省級科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A020209035) 國家科技支撐計(jì)劃(2012BAD26B03)
【分類號】：S917.4
【正文快照】： 生長激素釋放激素(growth hormone releasinghormone,GHRH)是一種小分子多肽,為PACAP/胰高血糖素(pituitary adenylate cyclase-activatingpolypeptide,PACAP/glucagon)超家族成員,主要由丘腦下部的弓狀核合成和分泌[1-2],其主要的功能是通過與GHRH受體結(jié)合刺激垂體合成和分泌

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