本文關(guān)鍵詞：內(nèi)參基因加標(biāo)法定量土壤微生物目標(biāo)基因絕對(duì)拷貝數(shù)

  更多相關(guān)文章： 土壤 含水率 DNA得率 定量PCR 絕對(duì)定量 內(nèi)參基因 腐殖酸抑制

【摘要】：【目的】通過熒光定量PCR技術(shù)對(duì)土壤微生物目標(biāo)基因進(jìn)行絕對(duì)定量,其定量結(jié)果的準(zhǔn)確性容易受到DNA提取得率以及腐殖酸抑制性的影響�！痉椒ā坎捎脙�(nèi)參基因加標(biāo)法,利用構(gòu)建的突變質(zhì)粒DNA,對(duì)供試水稻土壤樣品中的微生物16S r RNA目標(biāo)基因的絕對(duì)拷貝數(shù)進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),用來表征該樣品中細(xì)菌群落總體豐度。在定量前通過雙向引物擴(kuò)增方法驗(yàn)證突變質(zhì)粒中的內(nèi)參基因?qū)┰囃寥赖奶禺愋�。【結(jié)果】不同水稻土壤樣品的DNA提取量在樣品間差異較大。通過內(nèi)參基因加標(biāo)法對(duì)DNA提取量進(jìn)行校正,顯著提高了16S r RNA基因絕對(duì)定量的精確度。不同水稻土壤樣品間的變異系數(shù)為17.8,與未加標(biāo)處理相比降低了66.7%。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步通過內(nèi)參基因加標(biāo)法對(duì)土壤有機(jī)質(zhì)和含水率均呈現(xiàn)典型空間特征差異的6處亞熱帶濕地土壤樣品中的16S r RNA基因進(jìn)行絕對(duì)定量。16S r RNA基因絕對(duì)拷貝數(shù)與土壤微生物生物量碳具有顯著的線性相關(guān)性(R2=0.694,P0.001),表明內(nèi)參校正后的16S r RNA基因絕對(duì)拷貝數(shù)可以準(zhǔn)確反映單位質(zhì)量土壤中微生物的豐度。【結(jié)論】?jī)?nèi)參基因加標(biāo)法可以對(duì)DNA提取得率以及腐殖酸對(duì)PCR擴(kuò)增的抑制性進(jìn)行校正,從而提高絕對(duì)定量的準(zhǔn)確性�；趦�(nèi)參基因加標(biāo)法的目標(biāo)基因絕對(duì)定量PCR檢測(cè),可作為土壤微生物生物量測(cè)量,以及微生物功能基因絕對(duì)豐度定量的一種核酸檢測(cè)方法。
【作者單位】： 國(guó)家高原濕地研究中心西南林業(yè)大學(xué);浙江大學(xué)環(huán)境科學(xué)研究所環(huán)境與資源學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 土壤 含水率 DNA得率 定量PCR 絕對(duì)定量 內(nèi)參基因 腐殖酸抑制
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.41373074) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015FD026)~~
【分類號(hào)】：S154.3
【正文快照】： 熒光定量PCR技術(shù)(Quantitative real-time PCR,q PCR)可以對(duì)土壤微生物目標(biāo)基因進(jìn)行定量化檢測(cè),從而反映某類微生物的群落數(shù)量豐度(如對(duì)16Sr RNA基因或18S r RNA基因進(jìn)行定量)或功能豐度(如對(duì)碳固定基因或氮硝化基因進(jìn)行定量)。常用的定量檢測(cè)方法主要分為相對(duì)定量和絕對(duì)定量

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【相似文獻(xiàn)】

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3 向s慍，

本文編號(hào)：1048364