本文關鍵詞：花生過敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表達

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【摘要】：本實驗首先從花生中提取總RNA,利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應技術克隆了花生過敏原蛋白Ara h 6全c DNA,并以此為模板擴增出Ara h 6目的基因。將目的基因與p MD19-T Simple質(zhì)粒進行重組后轉(zhuǎn)入BL21(DE3)宿主表達菌中,異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導產(chǎn)物表達,并利用鎳離子親和層析純化表達產(chǎn)物。DNA測序結果顯示Ara h 6基因片段全長為438 bp,編碼145個氨基酸,與已知該蛋白DNA序列97%相同;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結果顯示表達產(chǎn)物分子質(zhì)量為24 k D,與融合組氨酸標簽的重組Ara h 6蛋白理論分子質(zhì)量相符;質(zhì)譜鑒定結果表明重組蛋白的一級結構與天然Ara h 6匹配度為100%;Western blotting結果顯示融合蛋白能夠為抗Ara h 6多克隆抗體所識別,具有免疫原性。
【作者單位】： 南昌大學食品科學與技術國家重點實驗室中德聯(lián)合研究院;浙江紡織服裝職業(yè)技術學院;廣東省疾病預防控制中心;
【關鍵詞】： 花生 過敏原 Ara h 基因克隆表達 質(zhì)譜鑒定
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃項目(2011BAK10B03) 國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2013AA102205) 江西省科技支撐計劃項目(20133BBF60004)
【分類號】：S565.2;TS201.21
【正文快照】： 食物過敏是人體對某些食物產(chǎn)生的變態(tài)反應,可導致多種臨床病癥,嚴重的會引起過敏性休克甚至死亡等[1-2]。據(jù)相關的流行病學研究表明,食物過敏影響約5%兒童及3%~4%成年人的健康,且呈增長趨勢[3]。90%食物過敏反應是由花生、魚、貝類、奶、蛋、大豆、堅果和小麥等八類高致敏性食

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