本文關(guān)鍵詞：S100A10基因沉默對(duì)人軟骨細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性的影響

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【摘要】：目的針對(duì)人S100A10基因設(shè)計(jì)siRNA序列并構(gòu)建shRNA表達(dá)載體;重組載體轉(zhuǎn)染人關(guān)節(jié)軟骨(HCs)細(xì)胞,觀察細(xì)胞內(nèi)S100A10基因表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)活性的影響。方法登陸美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù),根據(jù)人鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)基因信息,設(shè)計(jì)3條針對(duì)其編碼區(qū)(CDS)區(qū)的小干擾RNA(siRNA)序列。根據(jù)設(shè)計(jì)的siRNA序列,設(shè)計(jì)兩條互補(bǔ)的shRNA序列,構(gòu)建shRNA重組表達(dá)載體;陽(yáng)離子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染shRNA重組表達(dá)載體到HCs細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后48 h,收集細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA及總蛋白,使用實(shí)時(shí)PCR(RT-PCR)及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中S100A10 mRNA及蛋白相對(duì)含量;Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB的P65及P50亞基磷酸化。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用單因素方差分析。結(jié)果成功設(shè)計(jì)siRNA序列并成功構(gòu)建了shRNA表達(dá)載體;mRNA及蛋白含量檢測(cè)結(jié)果顯示,三條siRNA序列對(duì)目的基因均有沉默效果,其中1號(hào)siRNA序列最為-有效,其轉(zhuǎn)染后48 h,細(xì)胞內(nèi)mRNA及蛋白含量相比較未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,分別下降了74.2%和76.4%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.21,P0.01);HCs細(xì)胞內(nèi)S100A10基因沉默,能夠明顯抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性,與對(duì)照組比較,P65及P50亞基磷酸化明顯減弱(t=3.02,P0.01)。結(jié)論 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs細(xì)胞內(nèi)NF-κB活性。
【作者單位】： 江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： 鈣結(jié)合蛋白A RNA干擾 NF-kappa B
【基金】：江蘇省衛(wèi)計(jì)委科研項(xiàng)目(H201256) 江蘇省“333工程”科研基金資助項(xiàng)目(BAR2014143)
【分類(lèi)號(hào)】：R684
【正文快照】： 作者單位:224006江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院骨科Corresponding author:Xu Xiaozu,Email:scztougao@163.com鈣結(jié)合蛋白A10(S100 calcium-binding proteinA10,S100A10),也稱(chēng)為P11或膜聯(lián)蛋白Ⅱ輕鏈,是一個(gè)獨(dú)特的S100蛋白家族成員,膜聯(lián)蛋白(AnnexinⅡ)、磷脂酶A2(phospholipase A2,

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本文編號(hào)：1031820