本文關鍵詞：S100A10基因沉默對人軟骨細胞內核轉錄因子NF-κB活性的影響

  更多相關文章： 鈣結合蛋白A RNA干擾 NF-kappa B

【摘要】：目的針對人S100A10基因設計siRNA序列并構建shRNA表達載體;重組載體轉染人關節(jié)軟骨(HCs)細胞,觀察細胞內S100A10基因表達及其對細胞內核轉錄因子κB(NF-κB)活性的影響。方法登陸美國國家生物技術信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫,根據(jù)人鈣結合蛋白A10(S100A10)基因信息,設計3條針對其編碼區(qū)(CDS)區(qū)的小干擾RNA(siRNA)序列。根據(jù)設計的siRNA序列,設計兩條互補的shRNA序列,構建shRNA重組表達載體;陽離子脂質體法轉染shRNA重組表達載體到HCs細胞,轉染后48 h,收集細胞,提取細胞總RNA及總蛋白,使用實時PCR(RT-PCR)及蛋白質印跡法(Western blot)的方法檢測轉染后細胞中S100A10 mRNA及蛋白相對含量;Western blot檢測細胞內NF-κB的P65及P50亞基磷酸化。數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用單因素方差分析。結果成功設計siRNA序列并成功構建了shRNA表達載體;mRNA及蛋白含量檢測結果顯示,三條siRNA序列對目的基因均有沉默效果,其中1號siRNA序列最為-有效,其轉染后48 h,細胞內mRNA及蛋白含量相比較未轉染組細胞,分別下降了74.2%和76.4%,差異均有統(tǒng)計學意義(t=5.21,P0.01);HCs細胞內S100A10基因沉默,能夠明顯抑制核轉錄因子NF-κB活性,與對照組比較,P65及P50亞基磷酸化明顯減弱(t=3.02,P0.01)。結論 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs細胞內NF-κB活性。
【作者單位】： 江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院骨科;
【關鍵詞】： 鈣結合蛋白A RNA干擾 NF-kappa B
【基金】：江蘇省衛(wèi)計委科研項目(H201256) 江蘇省“333工程”科研基金資助項目(BAR2014143)
【分類號】：R684
【正文快照】： 作者單位:224006江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院骨科Corresponding author:Xu Xiaozu,Email:scztougao@163.com鈣結合蛋白A10(S100 calcium-binding proteinA10,S100A10),也稱為P11或膜聯(lián)蛋白Ⅱ輕鏈,是一個獨特的S100蛋白家族成員,膜聯(lián)蛋白(AnnexinⅡ)、磷脂酶A2(phospholipase A2,

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Sun ZW,Andersson R,樊華;核轉錄因子NF-κB的臨床意義[J];中國實用外科雜志;2002年02期

2 付笑飛;姚尚龍;;全身炎性反應綜合征與細胞核轉錄因子-κB[J];華中醫(yī)學雜志;2007年05期

3 熊盈;陳思嬌;宋今丹;;晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體-核轉錄因子-κB/…哺乳類雷帕霉素靶蛋白通路在2型糖尿病大血管并發(fā)癥中的作用[J];國外醫(yī)學(老年醫(yī)學分冊);2008年06期

4 王今越;王小虹;陳民盛;;核轉錄因子κB與肌細胞的生長和運動[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年50期

5 王勇,黃文華;一種改進的核轉錄因子的電泳遷移率改變分析法[J];第三軍醫(yī)大學學報;2001年01期

6 鄭仲謹;核轉錄因子κB在全身炎癥反應綜合征中的作用[J];免疫學雜志;2001年04期

7 國華,梁華平,羅艷;創(chuàng)傷與核轉錄因子[J];創(chuàng)傷外科雜志;2002年02期

8 游興姬,毛積芳;核轉錄因子-κB與疾病治療[J];生命的化學;2002年05期

9 陳柏梁;段明科;;核轉錄因子κB與肺缺血再灌注損傷[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年06期

10 胡蓉;姜虹;朱也森;;核轉錄因子-κB在肺疾病中的表達[J];實用醫(yī)學雜志;2009年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂志平;劉曉燕;;保肝寧對大鼠肝內核轉錄因子κB表達的影響[A];第十三次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2004年

2 董飛俠;程錦國;黃蔚霞;;頻復發(fā)性腎病核轉錄因子κ_B活性改變的臨床意義[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

3 張艷;李偉;;利拉魯肽對人臍靜脈內皮細胞中核轉錄因子κB和單核細胞趨化蛋白1表達的影響[A];中華醫(yī)學會糖尿病學分會第十六次全國學術會議論文集[C];2012年

4 王宏偉;陸江陽;;核轉錄因子-кB信號途徑調節(jié)樹突狀細胞功能的研究進展[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

5 韓恩善;徐永輝;王云;郭德和;;核轉錄因子-κB在體外循環(huán)手術心肌缺血及再灌注損傷中的表達及其意義[A];第一屆寧夏醫(yī)學會檢驗學分會學術年會論文匯編[C];2005年

6 韓恩善;徐永輝;;核轉錄因子-κB在體外循環(huán)手術心肌缺血及再灌注損傷中的表達及其意義[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

7 羅艷;梁華平;徐祥;胡承香;耿波;王正國;;創(chuàng)傷后IL-2表達受抑與核轉錄因子NFAT變化的關系[A];2001年全國中西醫(yī)結合急救醫(yī)學學術會議論文集[C];2001年

8 周塵飛;計駿;袁菲;于穎彥;劉炳亞;張俊;朱正綱;;貝伐單抗對裸鼠胃癌移檀瘤血管內皮細胞生長因子和核轉錄因子Sp1表達影響[A];第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文匯編[C];2014年

9 路小光;劉莉;范治偉;康新;王屹剛;康利民;白黎智;戰(zhàn)麗彬;劉偉光;;Toll樣受體4/核轉錄因子κB在大鼠重癥急性胰腺炎[A];第三屆重癥醫(yī)學大會論文匯編[C];2009年

10 王紀文;曲鵬;姜華;王虹艷;李桂華;和亞萍;富晶;呂申;;抑制核轉錄因子-κB對Toll樣受體4在Goldblatt鼠左心室心肌中表達的影響[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;古藺肝蘇和NF－kB系統(tǒng)[N];健康報;2007年

2 常麗君;研究發(fā)現(xiàn)慢性炎癥和癌癥之間新聯(lián)系[N];科技日報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 朱亞勤;三葉草肽Ⅲ（TFF3）調節(jié)腸上皮細胞核轉錄因子NF-κB及其新的負反饋調節(jié)子扭蛋白Twist的機制：TFF3與腫瘤壞死因子作用的比較[D];中國醫(yī)科大學;2006年

2 姜玉聲;鮑（Haliotis diversicolor supertexta）核轉錄因子Ab-Rel的功能與特性分析及分子檢測方法的建立[D];浙江大學;2006年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 石萌萌;NDRG2基因通過Zc3h12d酶在核轉錄因子-κB傳導通路調控中的作用機制[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

2 滕萍萍;阿托伐他汀對動脈粥樣硬化大鼠熱休克蛋白60、核轉錄因子-κB表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2016年

3 方梅榮;骨橋蛋白和核轉錄因子在慢性環(huán)孢素A腎毒性大鼠腎組織中的作用[D];延邊大學;2014年

4 劉南;LPS對人牙周韌帶細胞核轉錄因子-κB表達及炎性細胞因子分泌的研究[D];天津醫(yī)科大學;2009年

5 樊予惠;川芎嗪對肝星狀細胞核轉錄因子-κB、轉化生長因子-β_1的影響[D];鄭州大學;2008年

6 傅瑞麗;調控Toll樣受體2_核轉錄因子-κB信號通路對大鼠呼吸機相關性肺損傷的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

7 張新玉;無機砷對核轉錄因子Nrf2和血紅素單加氧酶HO-1的誘導作用[D];中國醫(yī)科大學;2009年

8 李巧榮;COPD患者支氣管粘膜核轉錄因子過氧化物酶增殖物激活受體-γ、基質金屬蛋白酶-9和誘生型一氧化氮合酶的表達[D];山東大學;2009年

9 馮偉偉;大黃上清液聯(lián)合母乳對Caco-2炎癥細胞Toll樣受體及核轉錄因子表達的影響[D];南京中醫(yī)藥大學;2013年

10 于東帥;雙斑側溝繭蜂病毒調控寄主核轉錄因子NF-κB和翻譯起始因子eIF4F[D];云南大學;2015年

，

本文編號：1031820