發(fā)布時間：2017-10-12 13:40

  本文關(guān)鍵詞：黨參CpUGPase基因的克隆、序列分析與原核表達

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【摘要】：目的為研究黨參多糖代謝途徑,從黨參Codonopsis pilosula根中克隆多糖代謝關(guān)鍵酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶CpUGPase基因,并進行序列分析和原核表達。方法根據(jù)黨參轉(zhuǎn)錄組中CpUGPase基因序列設(shè)計引物,通過RT-PCR擴增得CpUGPase開放閱讀框(ORF)序列,并進行TA克隆、測序和序列分析;構(gòu)建原核表達載體PET-28a-CpUGPase,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)后,在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)下進行表達。結(jié)果 CpUGPase ORF序列全長1 413bp,編碼470個氨基酸。序列分析表明,CpUGPase基因具有保守的UGPase_euk催化位點,屬于A型糖基轉(zhuǎn)移酶蛋白家族。構(gòu)建PET-28a-CpUGPase重組質(zhì)粒,獲得穩(wěn)定的原核表達體系。SDS-PAGE結(jié)果顯示該蛋白的大小約54 900,與預(yù)測的蛋白相對分子質(zhì)量一致。結(jié)論從黨參根中克隆得到CpUGPase基因,并建立了穩(wěn)定的原核表達體系,為進一步純化CpUGPase蛋白,研究其結(jié)構(gòu)和功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;山西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 黨參 CpUGPase 基因克隆 序列分析 原核表達
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81072987) 國家科技支撐計劃項目(2011BAI07B07) 山西省高等學(xué)校中青年拔尖創(chuàng)新人才支持計劃(晉教材[2012]146號)
【分類號】：S567.53
【正文快照】： 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase,UGPase)在所有的真核生物碳水化合物代謝中起重要作用,主要催化反應(yīng)Glc-1-P+UTP UDPG+PPi[1]。其產(chǎn)物UDPG(尿苷二磷酸葡萄糖)作為葡萄糖基供體主要參與蔗糖、纖維素、胼胝質(zhì)、糖原等寡糖與多糖的合成,同時也是尿苷二

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本文編號：1019050