本文關(guān)鍵詞：‘小白杏’自交不親和SFB基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：【目的】應(yīng)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)在分子水平調(diào)控杏自交不親和性狀,為培育自交親和杏品種奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā炕谀辖越徊挥H和杏品種‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉決定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全長(zhǎng)序列,選取SFB基因變異區(qū)上游距起始密碼子61 bp處、大小為29 bp的片段作為干擾序列,棉花基因組DNA 242 bp的序列作為間隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)構(gòu)建SFB基因發(fā)卡結(jié)構(gòu)(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切連接到植物表達(dá)載體p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,構(gòu)建SFB基因RNAi表達(dá)載體;用凍融轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【結(jié)果】測(cè)序結(jié)果表明臂長(zhǎng)29 bp、莖環(huán)242 bp的SFB基因ihp RNA結(jié)構(gòu)融合成功,雙酶切檢驗(yàn)和PCR驗(yàn)證結(jié)果表明,該結(jié)構(gòu)正確地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的啟動(dòng)子和終止子之間,說(shuō)明SFB基因的RNAi表達(dá)載體p CAMBIA-RNAi-SFB構(gòu)建成功;PCR驗(yàn)證和測(cè)序結(jié)果也表明重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404中�！窘Y(jié)論】研究結(jié)果表明,應(yīng)用融合PCR結(jié)合酶切連接的方法構(gòu)建SFB基因的RNAi表達(dá)載體是可行的,為RNAi技術(shù)在果樹(shù)自交不親和性狀改良上的應(yīng)用創(chuàng)造了條件。
【作者單位】： 石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院·特色果蔬栽培生理與種質(zhì)資源利用兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;西南大學(xué)生物技術(shù)中心·農(nóng)業(yè)部生物技術(shù)與作物品質(zhì)改良重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 杏 自交不親和 SFB基因 RNAi表達(dá)載體
【基金】：國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目(31272129)
【分類(lèi)號(hào)】：S662.2
【正文快照】： 新疆是世界杏的起源中心之一,具有非常豐富的種質(zhì)資源[1-3]�！“仔印�(Prunus armeniaca‘Xiao-baixing’)屬薔薇科(Rosaeeae)李亞科(Prunoideae)杏屬(Armeriaca)普通杏種(A.valgarislam)植物,是起源于新疆的著名杏品種之一,主要產(chǎn)于具有“中國(guó)白杏之鄉(xiāng)”稱(chēng)號(hào)的庫(kù)車(chē)縣和輪臺(tái)

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